中国兽药杂志
中國獸藥雜誌
중국수약잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY DRUG
2006年
12期
23-26,14
,共5页
李虹%朱良全%刘亚华%范书才
李虹%硃良全%劉亞華%範書纔
리홍%주량전%류아화%범서재
大肠杆菌%K88纤毛抗原%K88抗血清
大腸桿菌%K88纖毛抗原%K88抗血清
대장간균%K88섬모항원%K88항혈청
以5%绵羊血改良Minca琼脂筛选和克隆表达良好的K88+菌株,改良Minca琼脂培养获得K88菌液.用加热法及高速匀浆法使K88纤毛从菌体上脱下.饱和硫酸铵沉淀粗提,用Sepha-rose CL-4B凝胶过滤纯化K88抗原.提纯的抗原经SDS-PAGE电泳测定其分子量约为25 000,且仅此一条蛋白带;与K88抗血清进行琼脂扩散试验只出现一条沉淀线.用提纯的抗原经多次免疫家兔制备了K88抗血清.抗血清在玻板凝集试验中只凝集K88菌株,不凝集K99,987P或F41菌株;在琼扩试验中,只与K88粗提抗原出现一条沉淀线,且效价为1∶64,而不与K99,987P抗原出现沉淀线;在免疫电泳试验中,与无细胞K88纤毛液只出现一条沉淀线.鉴定结果表明,所制备的K88血清特异性强、效价高,可作为单因子血清用于凝集试验、琼扩试验等血清学试验,对K88菌株进行鉴定,对K88纤毛抗原进行定性和定量检测.
以5%綿羊血改良Minca瓊脂篩選和剋隆錶達良好的K88+菌株,改良Minca瓊脂培養穫得K88菌液.用加熱法及高速勻漿法使K88纖毛從菌體上脫下.飽和硫痠銨沉澱粗提,用Sepha-rose CL-4B凝膠過濾純化K88抗原.提純的抗原經SDS-PAGE電泳測定其分子量約為25 000,且僅此一條蛋白帶;與K88抗血清進行瓊脂擴散試驗隻齣現一條沉澱線.用提純的抗原經多次免疫傢兔製備瞭K88抗血清.抗血清在玻闆凝集試驗中隻凝集K88菌株,不凝集K99,987P或F41菌株;在瓊擴試驗中,隻與K88粗提抗原齣現一條沉澱線,且效價為1∶64,而不與K99,987P抗原齣現沉澱線;在免疫電泳試驗中,與無細胞K88纖毛液隻齣現一條沉澱線.鑒定結果錶明,所製備的K88血清特異性彊、效價高,可作為單因子血清用于凝集試驗、瓊擴試驗等血清學試驗,對K88菌株進行鑒定,對K88纖毛抗原進行定性和定量檢測.
이5%면양혈개량Minca경지사선화극륭표체량호적K88+균주,개량Minca경지배양획득K88균액.용가열법급고속균장법사K88섬모종균체상탈하.포화류산안침정조제,용Sepha-rose CL-4B응효과려순화K88항원.제순적항원경SDS-PAGE전영측정기분자량약위25 000,차부차일조단백대;여K88항혈청진행경지확산시험지출현일조침정선.용제순적항원경다차면역가토제비료K88항혈청.항혈청재파판응집시험중지응집K88균주,불응집K99,987P혹F41균주;재경확시험중,지여K88조제항원출현일조침정선,차효개위1∶64,이불여K99,987P항원출현침정선;재면역전영시험중,여무세포K88섬모액지출현일조침정선.감정결과표명,소제비적K88혈청특이성강、효개고,가작위단인자혈청용우응집시험、경확시험등혈청학시험,대K88균주진행감정,대K88섬모항원진행정성화정량검측.
