水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2007年
1期
119-124
,共6页
朱蓉%张义兵%张奇亚%桂建芳
硃蓉%張義兵%張奇亞%桂建芳
주용%장의병%장기아%계건방
HRI%原核表达%多克隆抗体%病毒感染%诱导表达
HRI%原覈錶達%多剋隆抗體%病毒感染%誘導錶達
HRI%원핵표체%다극륭항체%병독감염%유도표체
血红素调节的eIF2α激酶HRI是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在血红素缺乏和热休克等胁迫存在时,通过磷酸化底物eIF2α调控真核细胞的蛋白合成.牙鲆PoHRI是在鱼类鉴定的第一个HRI基因.PCR克隆编码PoHRI蛋白1-200氨基酸的cDNA片段,定向插入pET32a构建表达载体.IPTG诱导,随后利用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,成功获得预期大小的融合蛋白.将纯化的融合蛋白免疫小鼠获得抗PoHRI多克隆抗体,抗体中和实验进一步证实了抗PoHRI多克隆抗体对PoHRI蛋白的特异性识别.在健康的牙鲆组织中能检测到PoHRI mRNA和蛋白的组成型表达.人工感染大鳞鲆弹状病毒SMRV诱导相应组织PoHRI的表达明显上调.结果表明,PoHRI是一种在牙鲆组织中广泛表达的蛋白,可能在抗病毒免疫反应中发挥某种功能.
血紅素調節的eIF2α激酶HRI是一種絲氨痠/囌氨痠蛋白激酶,在血紅素缺乏和熱休剋等脅迫存在時,通過燐痠化底物eIF2α調控真覈細胞的蛋白閤成.牙鲆PoHRI是在魚類鑒定的第一箇HRI基因.PCR剋隆編碼PoHRI蛋白1-200氨基痠的cDNA片段,定嚮插入pET32a構建錶達載體.IPTG誘導,隨後利用Ni2+-NTA親和層析柱純化,成功穫得預期大小的融閤蛋白.將純化的融閤蛋白免疫小鼠穫得抗PoHRI多剋隆抗體,抗體中和實驗進一步證實瞭抗PoHRI多剋隆抗體對PoHRI蛋白的特異性識彆.在健康的牙鲆組織中能檢測到PoHRI mRNA和蛋白的組成型錶達.人工感染大鱗鲆彈狀病毒SMRV誘導相應組織PoHRI的錶達明顯上調.結果錶明,PoHRI是一種在牙鲆組織中廣汎錶達的蛋白,可能在抗病毒免疫反應中髮揮某種功能.
혈홍소조절적eIF2α격매HRI시일충사안산/소안산단백격매,재혈홍소결핍화열휴극등협박존재시,통과린산화저물eIF2α조공진핵세포적단백합성.아평PoHRI시재어류감정적제일개HRI기인.PCR극륭편마PoHRI단백1-200안기산적cDNA편단,정향삽입pET32a구건표체재체.IPTG유도,수후이용Ni2+-NTA친화층석주순화,성공획득예기대소적융합단백.장순화적융합단백면역소서획득항PoHRI다극륭항체,항체중화실험진일보증실료항PoHRI다극륭항체대PoHRI단백적특이성식별.재건강적아평조직중능검측도PoHRI mRNA화단백적조성형표체.인공감염대린평탄상병독SMRV유도상응조직PoHRI적표체명현상조.결과표명,PoHRI시일충재아평조직중엄범표체적단백,가능재항병독면역반응중발휘모충공능.
