CAJ | 학술논문

在同种反应性T细胞(同种T细胞)识别的配体中, 抗原肽的作用是免疫学长期争论的问题, 即同种T细胞识别是否具有抗原肽特异性. 为了证实通过长期混合淋巴细胞培养(LTMLC)方法能够诱生抗原肽/MHC复合物(pMHC)特异性的同种T细胞, 本研究利用仅表达HLA-A2, TAP缺陷的T2细胞, 将酪氨酸激酶来源的自身抗原肽(Tyr369-377)和EB病毒来源的病毒抗原肽(LMP2A426-434)分别加载到T2细胞上, 使T2细胞提呈单一的T细胞抗原识别表位, 并且选择4个HLA-A2阳性(HLA-A2+ve)与4个HLA-A2阴性(HLA-A2-ve)个体的PBL样本, 与加载上述抗原肽的T2细胞混合培养. 在此实验系统中, HLA-A2+ve PBL与加载病毒抗原肽的T2细胞(T2/LMP)混合培养代表T细胞对普通抗原的反应, 而HLA-A2-ve PBL与加载自身抗原肽的T2细胞(T2/Tyr)混合培养则为T细胞对同种抗原的反应. 利用特异性pMHC四聚体染色与特异性细胞毒试验检测LTMLC诱生CTL的特异性, 其中利用HIV抗原肽(Gag77-85)作为对照. 结果显示: (ⅰ) T2/LMP与HLA-A2+ve个体的PBL混合培养产生CTL(CTL-T2/LMP), CTL-T2/LMP对T2/LMP的杀伤显著高于对照T2/HIV的杀伤(26.52%±3.72% vs 7.01%±0.87%, P＜0.001); LMP四聚体对CTL-T2/LMP染色的阳性细胞数显著高于对照HIV四聚体 (0.98%±0.33% vs 0.05%±0.01%, P=0.0014); (ⅱ) 加载自身抗原肽的T2细胞(T2/Tyr)可诱导HLA-A2-ve个体的PBL产生CTL(CTL-T2/Tyr), CTL-T2/Tyr对T2/Tyr的杀伤显著高于对T2/HIV的杀伤(28.07%±2.58% vs 6.87±1.01%, P＜0.001); Tyr四聚体对CTL-T2/Tyr染色的阳性细胞数显著高于HIV四聚体(0.88%±0.3% vs 0.06±0.03%, P=0.0018). 结果说明: 结合于自身MHC分子上的病毒抗原肽与结合于同种MHC分子上的自身抗原肽都能诱导产生抗原肽特异性的CTL; 在LTMLC诱生的同种CTL中, 有相当数量的CTL具有pMHC特异性, 这些同种CTL的识别机制与普通抗原反应性CTL一样, 识别的对象也是特异性的pMHC. 支持了同种抗原的pMHC种类繁多造成同种T细胞反应强度极高的假说. 利用LTMLC诱生抗原肽特异性同种T细胞方法对于T细胞过继治疗具有潜在的应用价值. 在同種反應性T細胞(同種T細胞)識彆的配體中, 抗原肽的作用是免疫學長期爭論的問題, 即同種T細胞識彆是否具有抗原肽特異性. 為瞭證實通過長期混閤淋巴細胞培養(LTMLC)方法能夠誘生抗原肽/MHC複閤物(pMHC)特異性的同種T細胞, 本研究利用僅錶達HLA-A2, TAP缺陷的T2細胞, 將酪氨痠激酶來源的自身抗原肽(Tyr369-377)和EB病毒來源的病毒抗原肽(LMP2A426-434)分彆加載到T2細胞上, 使T2細胞提呈單一的T細胞抗原識彆錶位, 併且選擇4箇HLA-A2暘性(HLA-A2+ve)與4箇HLA-A2陰性(HLA-A2-ve)箇體的PBL樣本, 與加載上述抗原肽的T2細胞混閤培養. 在此實驗繫統中, HLA-A2+ve PBL與加載病毒抗原肽的T2細胞(T2/LMP)混閤培養代錶T細胞對普通抗原的反應, 而HLA-A2-ve PBL與加載自身抗原肽的T2細胞(T2/Tyr)混閤培養則為T細胞對同種抗原的反應. 利用特異性pMHC四聚體染色與特異性細胞毒試驗檢測LTMLC誘生CTL的特異性, 其中利用HIV抗原肽(Gag77-85)作為對照. 結果顯示: (ⅰ) T2/LMP與HLA-A2+ve箇體的PBL混閤培養產生CTL(CTL-T2/LMP), CTL-T2/LMP對T2/LMP的殺傷顯著高于對照T2/HIV的殺傷(26.52%±3.72% vs 7.01%±0.87%, P＜0.001); LMP四聚體對CTL-T2/LMP染色的暘性細胞數顯著高于對照HIV四聚體 (0.98%±0.33% vs 0.05%±0.01%, P=0.0014); (ⅱ) 加載自身抗原肽的T2細胞(T2/Tyr)可誘導HLA-A2-ve箇體的PBL產生CTL(CTL-T2/Tyr), CTL-T2/Tyr對T2/Tyr的殺傷顯著高于對T2/HIV的殺傷(28.07%±2.58% vs 6.87±1.01%, P＜0.001); Tyr四聚體對CTL-T2/Tyr染色的暘性細胞數顯著高于HIV四聚體(0.88%±0.3% vs 0.06±0.03%, P=0.0018). 結果說明: 結閤于自身MHC分子上的病毒抗原肽與結閤于同種MHC分子上的自身抗原肽都能誘導產生抗原肽特異性的CTL; 在LTMLC誘生的同種CTL中, 有相噹數量的CTL具有pMHC特異性, 這些同種CTL的識彆機製與普通抗原反應性CTL一樣, 識彆的對象也是特異性的pMHC. 支持瞭同種抗原的pMHC種類繁多造成同種T細胞反應彊度極高的假說. 利用LTMLC誘生抗原肽特異性同種T細胞方法對于T細胞過繼治療具有潛在的應用價值.
재동충반응성T세포(동충T세포)식별적배체중, 항원태적작용시면역학장기쟁론적문제, 즉동충T세포식별시부구유항원태특이성. 위료증실통과장기혼합림파세포배양(LTMLC)방법능구유생항원태/MHC복합물(pMHC)특이성적동충T세포, 본연구이용부표체HLA-A2, TAP결함적T2세포, 장락안산격매래원적자신항원태(Tyr369-377)화EB병독래원적병독항원태(LMP2A426-434)분별가재도T2세포상, 사T2세포제정단일적T세포항원식별표위, 병차선택4개HLA-A2양성(HLA-A2+ve)여4개HLA-A2음성(HLA-A2-ve)개체적PBL양본, 여가재상술항원태적T2세포혼합배양. 재차실험계통중, HLA-A2+ve PBL여가재병독항원태적T2세포(T2/LMP)혼합배양대표T세포대보통항원적반응, 이HLA-A2-ve PBL여가재자신항원태적T2세포(T2/Tyr)혼합배양칙위T세포대동충항원적반응. 이용특이성pMHC사취체염색여특이성세포독시험검측LTMLC유생CTL적특이성, 기중이용HIV항원태(Gag77-85)작위대조. 결과현시: (ⅰ) T2/LMP여HLA-A2+ve개체적PBL혼합배양산생CTL(CTL-T2/LMP), CTL-T2/LMP대T2/LMP적살상현저고우대조T2/HIV적살상(26.52%±3.72% vs 7.01%±0.87%, P＜0.001); LMP사취체대CTL-T2/LMP염색적양성세포수현저고우대조HIV사취체 (0.98%±0.33% vs 0.05%±0.01%, P=0.0014); (ⅱ) 가재자신항원태적T2세포(T2/Tyr)가유도HLA-A2-ve개체적PBL산생CTL(CTL-T2/Tyr), CTL-T2/Tyr대T2/Tyr적살상현저고우대T2/HIV적살상(28.07%±2.58% vs 6.87±1.01%, P＜0.001); Tyr사취체대CTL-T2/Tyr염색적양성세포수현저고우HIV사취체(0.88%±0.3% vs 0.06±0.03%, P=0.0018). 결과설명: 결합우자신MHC분자상적병독항원태여결합우동충MHC분자상적자신항원태도능유도산생항원태특이성적CTL; 재LTMLC유생적동충CTL중, 유상당수량적CTL구유pMHC특이성, 저사동충CTL적식별궤제여보통항원반응성CTL일양, 식별적대상야시특이성적pMHC. 지지료동충항원적pMHC충류번다조성동충T세포반응강도겁고적가설. 이용LTMLC유생항원태특이성동충T세포방법대우T세포과계치료구유잠재적응용개치.