中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
8期
647-650
,共4页
吴永强%DONG Guan-mu%秦思远%杨晓明
吳永彊%DONG Guan-mu%秦思遠%楊曉明
오영강%DONG Guan-mu%진사원%양효명
嗜菌体%抗体库%Fab抗体
嗜菌體%抗體庫%Fab抗體
기균체%항체고%Fab항체
目的 构建大容量(＞108)的人源天然噬菌体抗体库.方法 提取人外周血淋巴细胞mRNA,反转录出cDNA第一链,以此为模板,PCR扩增重链(VH)和轻链(VL)基因片段.将VL基因PCR产物插入含Loxp和Loxp511序列的pDF载体中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建轻链库,再将VH基因PCR产物插入轻链库载体中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建初级库.进一步用初级库超感染BS1365菌,使其VH与VL发生重组,获得重组库,再利用重组库感染大肠杆菌XLI-Blue,构建工作库.结果 所有VH和VL亚类基因的扩增产物片段大小均与理论值相符,轻重链基因的克隆效率均为100%.初级库容量为108,滴度为6×1013;重组后的工作库有效容量为8×1010滴度至少为1×1013.结论 已构建容量为1010的人源天然噬菌体抗体库.
目的 構建大容量(＞108)的人源天然噬菌體抗體庫.方法 提取人外週血淋巴細胞mRNA,反轉錄齣cDNA第一鏈,以此為模闆,PCR擴增重鏈(VH)和輕鏈(VL)基因片段.將VL基因PCR產物插入含Loxp和Loxp511序列的pDF載體中,電轉化大腸桿菌XL1-Blue,構建輕鏈庫,再將VH基因PCR產物插入輕鏈庫載體中,電轉化大腸桿菌XL1-Blue,構建初級庫.進一步用初級庫超感染BS1365菌,使其VH與VL髮生重組,穫得重組庫,再利用重組庫感染大腸桿菌XLI-Blue,構建工作庫.結果 所有VH和VL亞類基因的擴增產物片段大小均與理論值相符,輕重鏈基因的剋隆效率均為100%.初級庫容量為108,滴度為6×1013;重組後的工作庫有效容量為8×1010滴度至少為1×1013.結論 已構建容量為1010的人源天然噬菌體抗體庫.
목적 구건대용량(＞108)적인원천연서균체항체고.방법 제취인외주혈림파세포mRNA,반전록출cDNA제일련,이차위모판,PCR확증중련(VH)화경련(VL)기인편단.장VL기인PCR산물삽입함Loxp화Loxp511서렬적pDF재체중,전전화대장간균XL1-Blue,구건경련고,재장VH기인PCR산물삽입경련고재체중,전전화대장간균XL1-Blue,구건초급고.진일보용초급고초감염BS1365균,사기VH여VL발생중조,획득중조고,재이용중조고감염대장간균XLI-Blue,구건공작고.결과 소유VH화VL아류기인적확증산물편단대소균여이론치상부,경중련기인적극륭효솔균위100%.초급고용량위108,적도위6×1013;중조후적공작고유효용량위8×1010적도지소위1×1013.결론 이구건용량위1010적인원천연서균체항체고.
