中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2009年
2期
95-100
,共6页
徐志文%郭万柱%蒋清蓉%朱玲%熊丁杰%王印%徐凯%王小玉
徐誌文%郭萬柱%蔣清蓉%硃玲%熊丁傑%王印%徐凱%王小玉
서지문%곽만주%장청용%주령%웅정걸%왕인%서개%왕소옥
猪细小病毒%VP2基因%插入位点%病毒样颗粒
豬細小病毒%VP2基因%插入位點%病毒樣顆粒
저세소병독%VP2기인%삽입위점%병독양과립
以猪细小病毒(PPV)四川分离株SC-1的VP2基因3'端为靶点,在第1215和1216位之间插入长约700 bp的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,将重组后的PPV VP2-PCV2 ORF2克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建了重组质粒pEGFP.VO;经酶切和PCR鉴定后,采用脂质体介导法将重组质粒pEGFP.VO转染COS-7细胞,应用倒置荧光显微镜、电镜、免疫荧光以及生物信息学技术对表达产物进行观察分析.结果显示,重组质粒pEGFP.VO在COS-7细胞中得到表达,但在电镜下没有观察到病毒样颗粒.通过对PPV衣壳蛋白的三维结构分析及免疫荧光检测发现,PCV2 ORF2基因的插入位点位于PPVVP2基因的3'端,相应表达产物则位于VP2蛋白多肽的C端,且被其包裹在内,这可能影响了病毒样颗粒的形成,表明,PPV VP2基因3'端不适合外源基因插入构建重组病毒样颗粒.
以豬細小病毒(PPV)四川分離株SC-1的VP2基因3'耑為靶點,在第1215和1216位之間插入長約700 bp的豬圓環病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,將重組後的PPV VP2-PCV2 ORF2剋隆到真覈錶達載體pEGFP-C1中,構建瞭重組質粒pEGFP.VO;經酶切和PCR鑒定後,採用脂質體介導法將重組質粒pEGFP.VO轉染COS-7細胞,應用倒置熒光顯微鏡、電鏡、免疫熒光以及生物信息學技術對錶達產物進行觀察分析.結果顯示,重組質粒pEGFP.VO在COS-7細胞中得到錶達,但在電鏡下沒有觀察到病毒樣顆粒.通過對PPV衣殼蛋白的三維結構分析及免疫熒光檢測髮現,PCV2 ORF2基因的插入位點位于PPVVP2基因的3'耑,相應錶達產物則位于VP2蛋白多肽的C耑,且被其包裹在內,這可能影響瞭病毒樣顆粒的形成,錶明,PPV VP2基因3'耑不適閤外源基因插入構建重組病毒樣顆粒.
이저세소병독(PPV)사천분리주SC-1적VP2기인3'단위파점,재제1215화1216위지간삽입장약700 bp적저원배병독2형(PCV2)ORF2기인편단,장중조후적PPV VP2-PCV2 ORF2극륭도진핵표체재체pEGFP-C1중,구건료중조질립pEGFP.VO;경매절화PCR감정후,채용지질체개도법장중조질립pEGFP.VO전염COS-7세포,응용도치형광현미경、전경、면역형광이급생물신식학기술대표체산물진행관찰분석.결과현시,중조질립pEGFP.VO재COS-7세포중득도표체,단재전경하몰유관찰도병독양과립.통과대PPV의각단백적삼유결구분석급면역형광검측발현,PCV2 ORF2기인적삽입위점위우PPVVP2기인적3'단,상응표체산물칙위우VP2단백다태적C단,차피기포과재내,저가능영향료병독양과립적형성,표명,PPV VP2기인3'단불괄합외원기인삽입구건중조병독양과립.
