CAJ | 학술논문

目的利用RNA干扰技术(RNAi),研究表达Polo-like kinase 1 (Plk1)的短发夹RNA (shRNA)载体对肝癌细胞株BEL-7402生物学行为及对化疗药物长春新碱敏感性的影响. 方法根据靶基因的不同区域构建针对Plk1mRNA的两组干扰质粒shRNA-Plk1:Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396以及阴性对照质粒Plk1siRNA-hk,利用电穿孔法转染入肝癌细胞株BEL-7402,用长春新碱处理细胞后,用MTT法检测四组细胞的生长抑制率,计算IC50值,流式细胞仪检测各组细胞凋亡. 结果半定量RT-PCR检测Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396组Plk1mRNA、Cdc25CmRNA表达较Plk1siRNA-hk转染组与空白对照组明显下降(P＜0.01),p53mRNA表达增加.长春新碱处理后,Plk1siRNA-251组和Plk1siRNA-1396组与BEL7402组之间的生长抑制率有显著性差异(P＜0.01).5 μg/ml浓度长春新碱作用24h后,Plk1siRNA-251组和Plk1siRNA-1396组凋亡指数分别为19.09％ ±3.97％、19.80％ ±5.47％明显高于Plk1siRNA-hk组和BEL7402组(P＜0.01).结论成功筛选出两条能特异而高效抑制Plk1基因表达的shRNA,可以显著抑制Plk1 mRNA、Cdc25CmRNA及Plkl蛋白的表达,并使p53mRNA表达增高,并明显抑制细胞增殖,能增加长春新碱的化疗敏感性,从而为进一步研究该基因的功能和作用机制提供了新的手段.
목적 이용RNA간우기술(RNAi),연구표체Polo-like kinase 1 (Plk1)적단발협RNA (shRNA)재체대간암세포주BEL-7402생물학행위급대화료약물장춘신감민감성적영향. 방법 근거파기인적불동구역구건침대Plk1mRNA적량조간우질립shRNA-Plk1:Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396이급음성대조질립Plk1siRNA-hk,이용전천공법전염입간암세포주BEL-7402,용장춘신감처리세포후,용MTT법검측사조세포적생장억제솔,계산IC50치,류식세포의검측각조세포조망. 결과 반정량RT-PCR검측Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396조Plk1mRNA、Cdc25CmRNA표체교Plk1siRNA-hk전염조여공백대조조명현하강(P＜0.01),p53mRNA표체증가.장춘신감처리후,Plk1siRNA-251조화Plk1siRNA-1396조여BEL7402조지간적생장억제솔유현저성차이(P＜0.01).5 μg/ml농도장춘신감작용24h후,Plk1siRNA-251조화Plk1siRNA-1396조조망지수분별위19.09％ ±3.97％、19.80％ ±5.47％명현고우Plk1siRNA-hk조화BEL7402조(P＜0.01).결론 성공사선출량조능특이이고효억제Plk1기인표체적shRNA,가이현저억제Plk1 mRNA、Cdc25CmRNA급Plkl단백적표체,병사p53mRNA표체증고,병명현억제세포증식,능증가장춘신감적화료민감성,종이위진일보연구해기인적공능화작용궤제제공료신적수단.