细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2005年
3期
330-333
,共4页
余利红%高艳%王利红%韩洪彦%孙志贤%张成岗
餘利紅%高豔%王利紅%韓洪彥%孫誌賢%張成崗
여리홍%고염%왕리홍%한홍언%손지현%장성강
神经细胞突起生长诱向因子%合成肽%抗原表位%抗体制备%抗体鉴定
神經細胞突起生長誘嚮因子%閤成肽%抗原錶位%抗體製備%抗體鑒定
신경세포돌기생장유향인자%합성태%항원표위%항체제비%항체감정
目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定.方法:应用GoldKey软件分析人β-Netrin C末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽.然后采用碳化二亚胺法,将合成肽与载体蛋白-牛血清白蛋白(BSA)偶联作为抗原,免疫BALB/c小鼠.取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞并克隆化.对分泌的mAb的效价、Ig亚类(型)及特异性,分别用间接ELISA和Western blot进行鉴定.同时,通过免疫细胞化学染色鉴定抗体的特异性.另外,以偶联的分子免疫新西兰白兔,制备抗β-Netrin的pAb,用Western blot鉴定其特异性.结果:以确定的此16个氨基酸的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作为抗原表位,以人工合成多肽与BSA偶联作为免疫原,获得3株可稳定分泌特异性抗β-NetrinmAb的杂交瘤细胞.免疫细胞化学染色结果表明,这3株抗体均能特异性地识别细胞中的抗原.另外,制备了高效价的抗β-Netrin的pAb,并能特异性地识别原核表达的β-Netrin蛋白.结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功地制备出抗β-Netrin的pAb和mAb.
目的:製備抗神經細胞突起生長誘嚮因子(β-Netrin)的多剋隆抗體(pAb)和單剋隆抗體(mAb),併對其特異性進行鑒定.方法:應用GoldKey軟件分析人β-Netrin C末耑結構域氨基痠的序列(共114箇氨基痠),確定抗原錶位併人工閤成多肽.然後採用碳化二亞胺法,將閤成肽與載體蛋白-牛血清白蛋白(BSA)偶聯作為抗原,免疫BALB/c小鼠.取免疫小鼠脾細胞與Sp2/0骨髓瘤細胞常規融閤,依次進行HAT選擇培養,間接ELISA法篩選暘性的雜交瘤細胞併剋隆化.對分泌的mAb的效價、Ig亞類(型)及特異性,分彆用間接ELISA和Western blot進行鑒定.同時,通過免疫細胞化學染色鑒定抗體的特異性.另外,以偶聯的分子免疫新西蘭白兔,製備抗β-Netrin的pAb,用Western blot鑒定其特異性.結果:以確定的此16箇氨基痠的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作為抗原錶位,以人工閤成多肽與BSA偶聯作為免疫原,穫得3株可穩定分泌特異性抗β-NetrinmAb的雜交瘤細胞.免疫細胞化學染色結果錶明,這3株抗體均能特異性地識彆細胞中的抗原.另外,製備瞭高效價的抗β-Netrin的pAb,併能特異性地識彆原覈錶達的β-Netrin蛋白.結論:採用人工閤成多肽作為半抗原成功地製備齣抗β-Netrin的pAb和mAb.
목적:제비항신경세포돌기생장유향인자(β-Netrin)적다극륭항체(pAb)화단극륭항체(mAb),병대기특이성진행감정.방법:응용GoldKey연건분석인β-Netrin C말단결구역안기산적서렬(공114개안기산),학정항원표위병인공합성다태.연후채용탄화이아알법,장합성태여재체단백-우혈청백단백(BSA)우련작위항원,면역BALB/c소서.취면역소서비세포여Sp2/0골수류세포상규융합,의차진행HAT선택배양,간접ELISA법사선양성적잡교류세포병극륭화.대분비적mAb적효개、Ig아류(형)급특이성,분별용간접ELISA화Western blot진행감정.동시,통과면역세포화학염색감정항체적특이성.령외,이우련적분자면역신서란백토,제비항β-Netrin적pAb,용Western blot감정기특이성.결과:이학정적차16개안기산적서렬NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH작위항원표위,이인공합성다태여BSA우련작위면역원,획득3주가은정분비특이성항β-NetrinmAb적잡교류세포.면역세포화학염색결과표명,저3주항체균능특이성지식별세포중적항원.령외,제비료고효개적항β-Netrin적pAb,병능특이성지식별원핵표체적β-Netrin단백.결론:채용인공합성다태작위반항원성공지제비출항β-Netrin적pAb화mAb.
