细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
4期
381-382
,共2页
幽门螺杆菌%细胞毒素相关基因蛋白A%复性%纯化
幽門螺桿菌%細胞毒素相關基因蛋白A%複性%純化
유문라간균%세포독소상관기인단백A%복성%순화
目的:通过优化复性液的组成、 pH值、稀释度等, 建立幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(cytotoxin associated gene A, cagA)表达产物的制备级复性及纯化方法.方法:以包涵体形式存在的cagA表达产物先用5 mL/L Triton X-100进行初步纯化, 使其纯度达到约90%;再用含8 mol/L脲的变性剂溶解包涵体, 用复性液[0.1 mol/L Tris-HCl、 2 mmol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)、 0.1 mmol/L 氧化型谷胱甘肽(GSSG)、 8 mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)及 50 mmol/L 精氨酸(Arg), pH8.0]稀释复性后, 用DEAE-HP阴离子交换色谱进行纯化.结果:用稀释法复性及液相色谱法纯化, 一次可得到100～140 mg的cagA.ELISA检测其抗原活性为1∶ 16 000;SDS-PAGE检测纯度为98%.结论:用制备级复性、纯化制备的cagA, 可作为抗原用于制备检测抗幽门螺杆菌抗体的检测芯片, 效果良好, 并已获得国家新药批文.
目的:通過優化複性液的組成、 pH值、稀釋度等, 建立幽門螺桿菌細胞毒素相關基因A(cytotoxin associated gene A, cagA)錶達產物的製備級複性及純化方法.方法:以包涵體形式存在的cagA錶達產物先用5 mL/L Triton X-100進行初步純化, 使其純度達到約90%;再用含8 mol/L脲的變性劑溶解包涵體, 用複性液[0.1 mol/L Tris-HCl、 2 mmol/L 乙二胺四乙痠(EDTA)、 0.1 mmol/L 氧化型穀胱甘肽(GSSG)、 8 mmol/L還原型穀胱甘肽(GSH)及 50 mmol/L 精氨痠(Arg), pH8.0]稀釋複性後, 用DEAE-HP陰離子交換色譜進行純化.結果:用稀釋法複性及液相色譜法純化, 一次可得到100～140 mg的cagA.ELISA檢測其抗原活性為1∶ 16 000;SDS-PAGE檢測純度為98%.結論:用製備級複性、純化製備的cagA, 可作為抗原用于製備檢測抗幽門螺桿菌抗體的檢測芯片, 效果良好, 併已穫得國傢新藥批文.
목적:통과우화복성액적조성、 pH치、희석도등, 건립유문라간균세포독소상관기인A(cytotoxin associated gene A, cagA)표체산물적제비급복성급순화방법.방법:이포함체형식존재적cagA표체산물선용5 mL/L Triton X-100진행초보순화, 사기순도체도약90%;재용함8 mol/L뇨적변성제용해포함체, 용복성액[0.1 mol/L Tris-HCl、 2 mmol/L 을이알사을산(EDTA)、 0.1 mmol/L 양화형곡광감태(GSSG)、 8 mmol/L환원형곡광감태(GSH)급 50 mmol/L 정안산(Arg), pH8.0]희석복성후, 용DEAE-HP음리자교환색보진행순화.결과:용희석법복성급액상색보법순화, 일차가득도100～140 mg적cagA.ELISA검측기항원활성위1∶ 16 000;SDS-PAGE검측순도위98%.결론:용제비급복성、순화제비적cagA, 가작위항원용우제비검측항유문라간균항체적검측심편, 효과량호, 병이획득국가신약비문.
