中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2008年
3期
161-165
,共5页
余传信%李健%殷旭仁%华万全%梁幼生%高琪
餘傳信%李健%慇旭仁%華萬全%樑幼生%高琪
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日本血吸虫%四跨膜蛋白第二亲水基团基因%重叠PCR%基因合成%表达%免疫原性
日本血吸蟲%四跨膜蛋白第二親水基糰基因%重疊PCR%基因閤成%錶達%免疫原性
일본혈흡충%사과막단백제이친수기단기인%중첩PCR%기인합성%표체%면역원성
目的 合成和表达日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团(TSP2HD)基因,并研究其免疫原性.方法 采用重叠PCR人工合成日本血吸虫TSP2HD(aa107～aa182)完整基因片段,经测序正确后,将此片段插入表达载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒TSP2HD-PG,转化大肠埃希菌BL21(DE3),获得含重组表达质粒的转化子,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察TSP2HD融合蛋白表达情况.用谷胱甘肽(GST)融合蛋白纯化胶(glutathione sepharose 4B)从表达产物裂解上清中纯化GST-TSP2HD融合蛋白,用凝血酶切割融合蛋白,制备纯化的重组TSP2HD蛋白.通过蛋白质印迹(Western blotting)分析重组TSP2HD蛋白与血吸虫病患者血清及血吸虫重感染兔血清的免疫反应性;重组TSP2HD蛋白刺激血吸虫感染小鼠淋巴细胞进行淋巴细胞增殖试验,通过比较实验组与对照组脉冲指数(cpm)值的差异研究重组TSP2HD蛋白的免疫原性.结果经过3轮重叠PCR扩增,获得长228 bp的TSP2HD基因,序列分析证实与天然基因序列完全一致.含重组质粒TSP2HD-PG的转化子细菌,经IPTG诱导后表达相对分子质量(Mr)约为34000的可溶性GST-TSP2HD融合蛋白.凝血酶切割GST-TSP2HD融合蛋白获得纯化的重组TSP2HD蛋白.Western blotting分析证明,重组表达蛋白可被血吸虫重感染兔血清和血吸虫病患者血清识别,有较好的免疫反应性:重组TSP2HD蛋白能刺激血吸虫感染小鼠脾细胞增殖,实验组cpm值明显高于对照组,两者间差异有统计学意义(P<0.01).结论 日本血吸虫TSP2HD基因合成及表达获得成功,重组TSP2HD蛋白有天然免疫原性.
目的 閤成和錶達日本血吸蟲四跨膜蛋白第二親水基糰(TSP2HD)基因,併研究其免疫原性.方法 採用重疊PCR人工閤成日本血吸蟲TSP2HD(aa107～aa182)完整基因片段,經測序正確後,將此片段插入錶達載體pGEX-4T-3,構建重組錶達質粒TSP2HD-PG,轉化大腸埃希菌BL21(DE3),穫得含重組錶達質粒的轉化子,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)觀察TSP2HD融閤蛋白錶達情況.用穀胱甘肽(GST)融閤蛋白純化膠(glutathione sepharose 4B)從錶達產物裂解上清中純化GST-TSP2HD融閤蛋白,用凝血酶切割融閤蛋白,製備純化的重組TSP2HD蛋白.通過蛋白質印跡(Western blotting)分析重組TSP2HD蛋白與血吸蟲病患者血清及血吸蟲重感染兔血清的免疫反應性;重組TSP2HD蛋白刺激血吸蟲感染小鼠淋巴細胞進行淋巴細胞增殖試驗,通過比較實驗組與對照組脈遲指數(cpm)值的差異研究重組TSP2HD蛋白的免疫原性.結果經過3輪重疊PCR擴增,穫得長228 bp的TSP2HD基因,序列分析證實與天然基因序列完全一緻.含重組質粒TSP2HD-PG的轉化子細菌,經IPTG誘導後錶達相對分子質量(Mr)約為34000的可溶性GST-TSP2HD融閤蛋白.凝血酶切割GST-TSP2HD融閤蛋白穫得純化的重組TSP2HD蛋白.Western blotting分析證明,重組錶達蛋白可被血吸蟲重感染兔血清和血吸蟲病患者血清識彆,有較好的免疫反應性:重組TSP2HD蛋白能刺激血吸蟲感染小鼠脾細胞增殖,實驗組cpm值明顯高于對照組,兩者間差異有統計學意義(P<0.01).結論 日本血吸蟲TSP2HD基因閤成及錶達穫得成功,重組TSP2HD蛋白有天然免疫原性.
목적 합성화표체일본혈흡충사과막단백제이친수기단(TSP2HD)기인,병연구기면역원성.방법 채용중첩PCR인공합성일본혈흡충TSP2HD(aa107～aa182)완정기인편단,경측서정학후,장차편단삽입표체재체pGEX-4T-3,구건중조표체질립TSP2HD-PG,전화대장애희균BL21(DE3),획득함중조표체질립적전화자,이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)관찰TSP2HD융합단백표체정황.용곡광감태(GST)융합단백순화효(glutathione sepharose 4B)종표체산물렬해상청중순화GST-TSP2HD융합단백,용응혈매절할융합단백,제비순화적중조TSP2HD단백.통과단백질인적(Western blotting)분석중조TSP2HD단백여혈흡충병환자혈청급혈흡충중감염토혈청적면역반응성;중조TSP2HD단백자격혈흡충감염소서림파세포진행림파세포증식시험,통과비교실험조여대조조맥충지수(cpm)치적차이연구중조TSP2HD단백적면역원성.결과경과3륜중첩PCR확증,획득장228 bp적TSP2HD기인,서렬분석증실여천연기인서렬완전일치.함중조질립TSP2HD-PG적전화자세균,경IPTG유도후표체상대분자질량(Mr)약위34000적가용성GST-TSP2HD융합단백.응혈매절할GST-TSP2HD융합단백획득순화적중조TSP2HD단백.Western blotting분석증명,중조표체단백가피혈흡충중감염토혈청화혈흡충병환자혈청식별,유교호적면역반응성:중조TSP2HD단백능자격혈흡충감염소서비세포증식,실험조cpm치명현고우대조조,량자간차이유통계학의의(P<0.01).결론 일본혈흡충TSP2HD기인합성급표체획득성공,중조TSP2HD단백유천연면역원성.
