安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2010年
2期
149-153
,共5页
王参军%邹文艺%张玲%范清林%宋礼华
王參軍%鄒文藝%張玲%範清林%宋禮華
왕삼군%추문예%장령%범청림%송례화
突变%干扰素-α2b%基因表达%大肠杆菌
突變%榦擾素-α2b%基因錶達%大腸桿菌
돌변%간우소-α2b%기인표체%대장간균
目的 对人干扰素-α2b(hIFN-ao2b)基因的5'端进行突变,构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核高表达工程菌,以提高rhIFN-α2b的表达水平.方法 依据大肠杆菌密码子偏好性,在不改变hIFN-α2b的氨基酸序列的情况下,定点突变hIFN-α2b基因5'端序列并PCR扩增出rhIFN-α2b',克隆至温控型表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子,温度诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Westernblot鉴定分析并以WISH-VSV系统检测其抗病毒活性.结果 SDS-PAGE分析表明rhIFN-α2b表达量约占菌体总蛋白20.6%,Westem blot表明rhIFN-α2b具有与hIFN-α2b相同的免疫原性,WISH细胞-VSV病毒系统证实其比活性达1.2×108 IU/mg,与未突变工程菌一致.结论 突变hIFN-α2b基因5'端可以提高其表达水平,并成功构建出rhIFN-α2b原核高表达工程菌.
目的 對人榦擾素-α2b(hIFN-ao2b)基因的5'耑進行突變,構建重組人榦擾素-α2b(rhIFN-α2b)原覈高錶達工程菌,以提高rhIFN-α2b的錶達水平.方法 依據大腸桿菌密碼子偏好性,在不改變hIFN-α2b的氨基痠序列的情況下,定點突變hIFN-α2b基因5'耑序列併PCR擴增齣rhIFN-α2b',剋隆至溫控型錶達載體pJW2,轉化大腸桿菌DH5α,篩選暘性重組子,溫度誘導錶達,錶達產物進行SDS-PAGE、Westernblot鑒定分析併以WISH-VSV繫統檢測其抗病毒活性.結果 SDS-PAGE分析錶明rhIFN-α2b錶達量約佔菌體總蛋白20.6%,Westem blot錶明rhIFN-α2b具有與hIFN-α2b相同的免疫原性,WISH細胞-VSV病毒繫統證實其比活性達1.2×108 IU/mg,與未突變工程菌一緻.結論 突變hIFN-α2b基因5'耑可以提高其錶達水平,併成功構建齣rhIFN-α2b原覈高錶達工程菌.
목적 대인간우소-α2b(hIFN-ao2b)기인적5'단진행돌변,구건중조인간우소-α2b(rhIFN-α2b)원핵고표체공정균,이제고rhIFN-α2b적표체수평.방법 의거대장간균밀마자편호성,재불개변hIFN-α2b적안기산서렬적정황하,정점돌변hIFN-α2b기인5'단서렬병PCR확증출rhIFN-α2b',극륭지온공형표체재체pJW2,전화대장간균DH5α,사선양성중조자,온도유도표체,표체산물진행SDS-PAGE、Westernblot감정분석병이WISH-VSV계통검측기항병독활성.결과 SDS-PAGE분석표명rhIFN-α2b표체량약점균체총단백20.6%,Westem blot표명rhIFN-α2b구유여hIFN-α2b상동적면역원성,WISH세포-VSV병독계통증실기비활성체1.2×108 IU/mg,여미돌변공정균일치.결론 돌변hIFN-α2b기인5'단가이제고기표체수평,병성공구건출rhIFN-α2b원핵고표체공정균.
