畜牧兽医杂志
畜牧獸醫雜誌
축목수의잡지
JOURNAL OF ANIMAL SCIAENCE AND VETERINARY MEDICINE
2010年
3期
1-5
,共5页
杨玉艾%杨亮宇%杨忠良%初晓辉%毕保良%郑欢莉%孙永科
楊玉艾%楊亮宇%楊忠良%初曉輝%畢保良%鄭歡莉%孫永科
양옥애%양량우%양충량%초효휘%필보량%정환리%손영과
猪瘟病毒%分离鉴定%原核表达
豬瘟病毒%分離鑒定%原覈錶達
저온병독%분리감정%원핵표체
从云南10个地州15个大型猪场采集到的21份样品中分离得到5株猪瘟病毒.经测序鉴定昆明、玉溪、曲靖地区分离株的核苷酸序列99.99%同源,大理和宝山地区的核苷酸序列99.99%同源,5株分离毒均属于基因二群.5株分离毒在PK-15细胞上的平均毒价约为2×106 TCD50/mL,应用荧光抗体染色可以检测到CSFV.通过RT-PCR扩增猪瘟病毒约1 200 bp的E2蛋白全部抗原编码区序列,并将其分别克隆到pMD18-T载体中.序列分析结果表明,5株分离株的E2基因片段为1173bp,与猪瘟病毒Shimen株的核苷酸同源性为82.5%和84.3%,与C-株的核苷酸同源性分别为83.3%和85.4%.将E2基因插入原核表达载体pET-41a(+),转化进BL21(DE3)内进行表达,经IPTG诱导,E2蛋白能在菌体内高效表达,表达量达26.5%,蛋白分子质量约为41kD.本研究为猪瘟诊断抗原及基因工程疫苗的研制打下基础.
從雲南10箇地州15箇大型豬場採集到的21份樣品中分離得到5株豬瘟病毒.經測序鑒定昆明、玉溪、麯靖地區分離株的覈苷痠序列99.99%同源,大理和寶山地區的覈苷痠序列99.99%同源,5株分離毒均屬于基因二群.5株分離毒在PK-15細胞上的平均毒價約為2×106 TCD50/mL,應用熒光抗體染色可以檢測到CSFV.通過RT-PCR擴增豬瘟病毒約1 200 bp的E2蛋白全部抗原編碼區序列,併將其分彆剋隆到pMD18-T載體中.序列分析結果錶明,5株分離株的E2基因片段為1173bp,與豬瘟病毒Shimen株的覈苷痠同源性為82.5%和84.3%,與C-株的覈苷痠同源性分彆為83.3%和85.4%.將E2基因插入原覈錶達載體pET-41a(+),轉化進BL21(DE3)內進行錶達,經IPTG誘導,E2蛋白能在菌體內高效錶達,錶達量達26.5%,蛋白分子質量約為41kD.本研究為豬瘟診斷抗原及基因工程疫苗的研製打下基礎.
종운남10개지주15개대형저장채집도적21빈양품중분리득도5주저온병독.경측서감정곤명、옥계、곡정지구분리주적핵감산서렬99.99%동원,대리화보산지구적핵감산서렬99.99%동원,5주분리독균속우기인이군.5주분리독재PK-15세포상적평균독개약위2×106 TCD50/mL,응용형광항체염색가이검측도CSFV.통과RT-PCR확증저온병독약1 200 bp적E2단백전부항원편마구서렬,병장기분별극륭도pMD18-T재체중.서렬분석결과표명,5주분리주적E2기인편단위1173bp,여저온병독Shimen주적핵감산동원성위82.5%화84.3%,여C-주적핵감산동원성분별위83.3%화85.4%.장E2기인삽입원핵표체재체pET-41a(+),전화진BL21(DE3)내진행표체,경IPTG유도,E2단백능재균체내고효표체,표체량체26.5%,단백분자질량약위41kD.본연구위저온진단항원급기인공정역묘적연제타하기출.
