中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2010年
10期
923-925,948
,共4页
马全刚%潘志明%游猛%黄金林%耿士忠%李晓波%顾健%焦新安
馬全剛%潘誌明%遊猛%黃金林%耿士忠%李曉波%顧健%焦新安
마전강%반지명%유맹%황금림%경사충%리효파%고건%초신안
甲型 H1N1 流感病毒%血凝素%原核表达%免疫反应性
甲型 H1N1 流感病毒%血凝素%原覈錶達%免疫反應性
갑형 H1N1 류감병독%혈응소%원핵표체%면역반응성
目的 构建甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白,并对表达蛋白的免疫反应性进行分析.方法 人工合成A/California/05/2009 H1N1流感病毒的HA基因,以合成基因为模板,通过PCR方法 扩增出去除信号肽的HA部分基因片段,然后将去除信号肽的HA基因克隆至pET30a(+)原核表达载体中,构建出原核表达质粒,再将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)表达菌株;重组菌经IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析,Western blot分析表达产物的免疫反应性.结果 获得了HA基因的原核表达重组菌,细菌经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约67.4 ku大小的目的 蛋白表达条带,Western blot结果 显示,表达产物与人甲型H1N1流感患者阳性血清具有反应性.结论 成功表达出甲型H1N1流感病毒的HA蛋白,该蛋白具有良好的免疫反应性,为甲型H1N1流感的快速诊断方法 的建立提供了生物材料.
目的 構建甲型H1N1流感病毒HA基因的原覈錶達質粒,穫得融閤錶達蛋白,併對錶達蛋白的免疫反應性進行分析.方法 人工閤成A/California/05/2009 H1N1流感病毒的HA基因,以閤成基因為模闆,通過PCR方法 擴增齣去除信號肽的HA部分基因片段,然後將去除信號肽的HA基因剋隆至pET30a(+)原覈錶達載體中,構建齣原覈錶達質粒,再將重組質粒轉化E.coli BL21(DE3)錶達菌株;重組菌經IPTG誘導後,收集菌體進行SDS-PAGE電泳分析,Western blot分析錶達產物的免疫反應性.結果 穫得瞭HA基因的原覈錶達重組菌,細菌經IPTG誘導錶達後,SDS-PAGE分析可見約67.4 ku大小的目的 蛋白錶達條帶,Western blot結果 顯示,錶達產物與人甲型H1N1流感患者暘性血清具有反應性.結論 成功錶達齣甲型H1N1流感病毒的HA蛋白,該蛋白具有良好的免疫反應性,為甲型H1N1流感的快速診斷方法 的建立提供瞭生物材料.
목적 구건갑형H1N1류감병독HA기인적원핵표체질립,획득융합표체단백,병대표체단백적면역반응성진행분석.방법 인공합성A/California/05/2009 H1N1류감병독적HA기인,이합성기인위모판,통과PCR방법 확증출거제신호태적HA부분기인편단,연후장거제신호태적HA기인극륭지pET30a(+)원핵표체재체중,구건출원핵표체질립,재장중조질립전화E.coli BL21(DE3)표체균주;중조균경IPTG유도후,수집균체진행SDS-PAGE전영분석,Western blot분석표체산물적면역반응성.결과 획득료HA기인적원핵표체중조균,세균경IPTG유도표체후,SDS-PAGE분석가견약67.4 ku대소적목적 단백표체조대,Western blot결과 현시,표체산물여인갑형H1N1류감환자양성혈청구유반응성.결론 성공표체출갑형H1N1류감병독적HA단백,해단백구유량호적면역반응성,위갑형H1N1류감적쾌속진단방법 적건립제공료생물재료.
