CAJ | 학술논문

目的:构建及表达抗人CD80单链抗体(ScFv),并初步研究其生物学功能.方法:采用RT-PCR法从分泌鼠抗人CD80mAb的杂交瘤细胞株(4E5)中克隆VH和VL基因.用重叠延伸拼接PCR方法构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,并亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体,脂质体法转染中华仓鼠卵巢细胞(CHO),G418加压筛选.纯化抗CD80-ScFv,并分析其对膜型CD80的识别.竞争抑制实验分析抗CD80-ScFv与相应抗原的结合能力.MTT法体外分析抗CD80-ScFv对CD80介导的共刺激信号的阻断作用.结果:构建的抗CD80-ScFv基因全长为828 bp,经测序含有信号肽和连接肽.实验获得稳定表达细胞株SA-Ⅱ,其培养上清与L929-CD80细胞的阳性结合率达98%以上.抗体纯化后产率约为15.12 mg/L,其能够识别Raji和Daudi细胞天然表达的CD80分子,结合率分别为96.6%和95.0%.抗CD80-ScFv对鼠源亲本抗体4E5与抗原结合的竞争抑制率达98.67%,并能阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制PBMC的增殖,增殖率下降43.48%.结论:成功建立了抗CD80-ScFv CHO细胞的表达株(命名为SA-Ⅱ),该抗体能够特异识别细胞表面膜型CD80分子并介导相应的生物学功能.
목적:구건급표체항인CD80단련항체(ScFv),병초보연구기생물학공능.방법:채용RT-PCR법종분비서항인CD80mAb적잡교류세포주(4E5)중극륭VH화VL기인.용중첩연신병접PCR방법구건구유전도태적L-VH-Linker-VL단련항체기인,병아극륭지pIRES2-EGFP표체재체,지질체법전염중화창서란소세포(CHO),G418가압사선.순화항CD80-ScFv,병분석기대막형CD80적식별.경쟁억제실험분석항CD80-ScFv여상응항원적결합능력.MTT법체외분석항CD80-ScFv대CD80개도적공자격신호적조단작용.결과:구건적항CD80-ScFv기인전장위828 bp,경측서함유신호태화련접태.실험획득은정표체세포주SA-Ⅱ,기배양상청여L929-CD80세포적양성결합솔체98%이상.항체순화후산솔약위15.12 mg/L,기능구식별Raji화Daudi세포천연표체적CD80분자,결합솔분별위96.6%화95.0%.항CD80-ScFv대서원친본항체4E5여항원결합적경쟁억제솔체98.67%,병능조단CD80개도적공자격신호전도,억제PBMC적증식,증식솔하강43.48%.결론:성공건립료항CD80-ScFv CHO세포적표체주(명명위SA-Ⅱ),해항체능구특이식별세포표면막형CD80분자병개도상응적생물학공능.