安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2011年
9期
843-846
,共4页
蒋易楠%李长燕%詹轶群%杨晓明%汪思应
蔣易楠%李長燕%詹軼群%楊曉明%汪思應
장역남%리장연%첨질군%양효명%왕사응
GATA2转录因子%RNA干扰%慢病毒属%遗传载体
GATA2轉錄因子%RNA榦擾%慢病毒屬%遺傳載體
GATA2전록인자%RNA간우%만병독속%유전재체
目的 制备GATA2分子慢病毒干涉颗粒,建立GATA2表达下调的K562稳定细胞系.方法 采用第3代慢病毒包装系统,将携带特异性干涉GATA2的DNA序列克隆入穿梭质粒PsicoR中,转染K562细胞,Western blot法检测对内源性GATA2干涉效果.在脂质体介导下,siGATA2质粒同包装质粒plP1、plP2、pl/VSVG 共同转染HEK 293T细胞,获得慢病毒干涉颗粒,感染K562细胞,检测干涉效果.结果 构建的重组质粒经酶切,测序鉴定结果 正确,并有干涉效果.该重组质粒与包装质粒共同转染HEK293T细胞,获得干涉慢病毒并利用该病毒建立稳定表达的siGATA2-K562细胞系,经Western blot鉴定,稳定细胞系的内源性GATA2表达下调.结论 成功制备siGATA2干涉病毒颗粒并构建siGATA2-K562稳定细胞系,为后续实验奠定基础.
目的 製備GATA2分子慢病毒榦涉顆粒,建立GATA2錶達下調的K562穩定細胞繫.方法 採用第3代慢病毒包裝繫統,將攜帶特異性榦涉GATA2的DNA序列剋隆入穿梭質粒PsicoR中,轉染K562細胞,Western blot法檢測對內源性GATA2榦涉效果.在脂質體介導下,siGATA2質粒同包裝質粒plP1、plP2、pl/VSVG 共同轉染HEK 293T細胞,穫得慢病毒榦涉顆粒,感染K562細胞,檢測榦涉效果.結果 構建的重組質粒經酶切,測序鑒定結果 正確,併有榦涉效果.該重組質粒與包裝質粒共同轉染HEK293T細胞,穫得榦涉慢病毒併利用該病毒建立穩定錶達的siGATA2-K562細胞繫,經Western blot鑒定,穩定細胞繫的內源性GATA2錶達下調.結論 成功製備siGATA2榦涉病毒顆粒併構建siGATA2-K562穩定細胞繫,為後續實驗奠定基礎.
목적 제비GATA2분자만병독간섭과립,건립GATA2표체하조적K562은정세포계.방법 채용제3대만병독포장계통,장휴대특이성간섭GATA2적DNA서렬극륭입천사질립PsicoR중,전염K562세포,Western blot법검측대내원성GATA2간섭효과.재지질체개도하,siGATA2질립동포장질립plP1、plP2、pl/VSVG 공동전염HEK 293T세포,획득만병독간섭과립,감염K562세포,검측간섭효과.결과 구건적중조질립경매절,측서감정결과 정학,병유간섭효과.해중조질립여포장질립공동전염HEK293T세포,획득간섭만병독병이용해병독건립은정표체적siGATA2-K562세포계,경Western blot감정,은정세포계적내원성GATA2표체하조.결론 성공제비siGATA2간섭병독과립병구건siGATA2-K562은정세포계,위후속실험전정기출.
