CAJ | 학술논문

目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体.方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检测DKKl蛋白表达量.利用亲和层析法纯化DKK1蛋白,Wnt信号通路荧光素酶报告系统检测其生理活性.以纯化的DKKl蛋白免疫BALB/c小鼠获得相应抗体,并初步鉴定其抗原特异性.结果:DKK1蛋白分泌表达在Free-Style 293-F细胞培养液中,蛋白浓度在转染后第5天达最高(20 mg/L).所纯化的DKK1蛋白能够抑制Wnt3a蛋白诱导的报告基因的表达.抗DKK1小鼠抗体能特异性识别细胞内源性DKKl蛋白.结论:建立了在哺乳动物细胞悬浮培养系统中高效分泌表达人源DKK1重组蛋白的表达系统,并获得相应的特异性抗体,为其下一步结构与功能研究及在肿瘤中的应用奠定了实验基础.
목적:이용포유동물세포현부배양표체계통분비표체인원Dickkopf-1(DKK1)단백,순화단백병제비특이성항체.방법:구건DKK1진핵표체재체pCMVcStrep-DKK1,병차조지질체장재체순시전염입Free-Style293-F세포(무혈청배양),ELISA화단백인적법검측DKKl단백표체량.이용친화층석법순화DKK1단백,Wnt신호통로형광소매보고계통검측기생리활성.이순화적DKKl단백면역BALB/c소서획득상응항체,병초보감정기항원특이성.결과:DKK1단백분비표체재Free-Style 293-F세포배양액중,단백농도재전염후제5천체최고(20 mg/L).소순화적DKK1단백능구억제Wnt3a단백유도적보고기인적표체.항DKK1소서항체능특이성식별세포내원성DKKl단백.결론:건립료재포유동물세포현부배양계통중고효분비표체인원DKK1중조단백적표체계통,병획득상응적특이성항체,위기하일보결구여공능연구급재종류중적응용전정료실험기출.