卒中与神经疾病
卒中與神經疾病
졸중여신경질병
2012年
2期
67-71
,共5页
董传芳%刘雪平%徐松%王美霞%殷青青%孙志坚%游丽
董傳芳%劉雪平%徐鬆%王美霞%慇青青%孫誌堅%遊麗
동전방%류설평%서송%왕미하%은청청%손지견%유려
糖基化终末产物%阿尔茨海默病%活性氧%内质网应激
糖基化終末產物%阿爾茨海默病%活性氧%內質網應激
당기화종말산물%아이자해묵병%활성양%내질망응격
目的 研究糖基化终末产物(AGEs)对体外培养的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)内质网应激的影响,探讨AGEs在AD发病中的可能机制.方法 以糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)分别处理SH-SY5Y细胞0、12、24、48 h,蛋白质免疫印迹法检测内质网应激(ERS)相关蛋白GRP78、p-eIF2α、Caspase-12的表达水平.再将细胞随机分为正常对照组(NC组)、牛血清白蛋白对照组(BSA组)、AGE-BSA组、AGE-BSA+抗RAGE中和抗体组(RAGE-Ab组)、AGE-BSA+α-硫辛酸组(ALA组)、AGE-BSA+NADPH氧化酶抑制剂DPI组(DPI组).蛋白免疫印迹法半定量检测各组细胞ERS相关蛋白表达水平变化,同样处理后用免疫荧光染色观察GRP78、p-eIF2α表达水平,应用活性氧荧光探针DCFH-DA检测各组细胞活性氧 (ROS) 水平.结果 AGE-BSA处理细胞24 h后免疫蛋白印迹可见GRP78、p-eIF2α出现表达高峰,同时荧光染色可见两者高水平表达,48 h后Caspase-12表达水平显著升高,且ROS水平达到 NC 组的6.95倍.与AGE-BSA组相比,RAGE-Ab组、ALA组、DPI组的 ROS 水平都有不同程度的降低(P＜0.01),同时GRP78、p-eIF2α、Caspase-12的表达水平均有明显下调(P＜0.01或P＜0.05).结论 AGEs可诱导SH-SY5Y细胞ROS产生,并通过启动氧化应激及内质网应激对细胞造成损伤.
目的 研究糖基化終末產物(AGEs)對體外培養的神經母細胞瘤細胞(SH-SY5Y)內質網應激的影響,探討AGEs在AD髮病中的可能機製.方法 以糖基化脩飾的牛血清白蛋白(AGE-BSA)分彆處理SH-SY5Y細胞0、12、24、48 h,蛋白質免疫印跡法檢測內質網應激(ERS)相關蛋白GRP78、p-eIF2α、Caspase-12的錶達水平.再將細胞隨機分為正常對照組(NC組)、牛血清白蛋白對照組(BSA組)、AGE-BSA組、AGE-BSA+抗RAGE中和抗體組(RAGE-Ab組)、AGE-BSA+α-硫辛痠組(ALA組)、AGE-BSA+NADPH氧化酶抑製劑DPI組(DPI組).蛋白免疫印跡法半定量檢測各組細胞ERS相關蛋白錶達水平變化,同樣處理後用免疫熒光染色觀察GRP78、p-eIF2α錶達水平,應用活性氧熒光探針DCFH-DA檢測各組細胞活性氧 (ROS) 水平.結果 AGE-BSA處理細胞24 h後免疫蛋白印跡可見GRP78、p-eIF2α齣現錶達高峰,同時熒光染色可見兩者高水平錶達,48 h後Caspase-12錶達水平顯著升高,且ROS水平達到 NC 組的6.95倍.與AGE-BSA組相比,RAGE-Ab組、ALA組、DPI組的 ROS 水平都有不同程度的降低(P＜0.01),同時GRP78、p-eIF2α、Caspase-12的錶達水平均有明顯下調(P＜0.01或P＜0.05).結論 AGEs可誘導SH-SY5Y細胞ROS產生,併通過啟動氧化應激及內質網應激對細胞造成損傷.
목적 연구당기화종말산물(AGEs)대체외배양적신경모세포류세포(SH-SY5Y)내질망응격적영향,탐토AGEs재AD발병중적가능궤제.방법 이당기화수식적우혈청백단백(AGE-BSA)분별처리SH-SY5Y세포0、12、24、48 h,단백질면역인적법검측내질망응격(ERS)상관단백GRP78、p-eIF2α、Caspase-12적표체수평.재장세포수궤분위정상대조조(NC조)、우혈청백단백대조조(BSA조)、AGE-BSA조、AGE-BSA+항RAGE중화항체조(RAGE-Ab조)、AGE-BSA+α-류신산조(ALA조)、AGE-BSA+NADPH양화매억제제DPI조(DPI조).단백면역인적법반정량검측각조세포ERS상관단백표체수평변화,동양처리후용면역형광염색관찰GRP78、p-eIF2α표체수평,응용활성양형광탐침DCFH-DA검측각조세포활성양 (ROS) 수평.결과 AGE-BSA처리세포24 h후면역단백인적가견GRP78、p-eIF2α출현표체고봉,동시형광염색가견량자고수평표체,48 h후Caspase-12표체수평현저승고,차ROS수평체도 NC 조적6.95배.여AGE-BSA조상비,RAGE-Ab조、ALA조、DPI조적 ROS 수평도유불동정도적강저(P＜0.01),동시GRP78、p-eIF2α、Caspase-12적표체수평균유명현하조(P＜0.01혹P＜0.05).결론 AGEs가유도SH-SY5Y세포ROS산생,병통과계동양화응격급내질망응격대세포조성손상.
