上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2012年
7期
955-960
,共6页
蒋世忠%闫亚彬%谢飞%王娟%黄英%任兆瑞
蔣世忠%閆亞彬%謝飛%王娟%黃英%任兆瑞
장세충%염아빈%사비%왕연%황영%임조서
转基因小鼠%乳腺上皮细胞%真核表达载体%牛催乳素
轉基因小鼠%乳腺上皮細胞%真覈錶達載體%牛催乳素
전기인소서%유선상피세포%진핵표체재체%우최유소
目的 建立转基因小鼠乳腺上皮细胞模型,为研究乳腺内环境因素调控外源基因的表达和制备高效表达外源基因的乳腺生物反应器提供研究平台.方法 通过机械破碎和胶原酶消化的方法获取人转铁蛋白(hTF)转基因小鼠的乳腺上皮细胞,并进行体外原代培养.经胰蛋白酶纯化后,绘制乳腺上皮细胞生长曲线；免疫组织化学方法检测角蛋白18的表达；透射电子显微镜(透射电镜)观察乳腺上皮细胞超微结构；流式细胞仪检测细胞周期分布；显微镜下分析乳腺上皮细胞核型.将牛催乳素真核表达载体(pCMV-bPRL)转染至转基因乳腺上皮细胞中,检测外源bPRL的表达.结果 乳腺上皮细胞生长曲线呈“S”形；免疫荧光组织化学分析结果显示hTF转基因小鼠乳腺上皮细胞角蛋白18呈阳性表达；透射电镜观察发现乳腺上皮细胞胞核较大、偏位,有双核或多核,胞质丰富,空泡、粗面内质网、高尔基体丰富；流式细胞仪检测结果显示:乳腺上皮细胞增殖活跃,G2/M期+S期细胞占15％；细胞核型分析结果显示处于分裂期的细胞具有正常的二倍体,染色体完整.pCMV-bPRL转染乳腺上皮细胞24 h后,上清液中检测到bPRL的表达.结论 体外培养的转基因乳腺上皮细胞具有类似体内细胞的生物学特征,并可表达真核表达载体,为研究环境因素对乳腺功能的影响及制备乳腺生物反应器提供了一种细胞模型.
目的 建立轉基因小鼠乳腺上皮細胞模型,為研究乳腺內環境因素調控外源基因的錶達和製備高效錶達外源基因的乳腺生物反應器提供研究平檯.方法 通過機械破碎和膠原酶消化的方法穫取人轉鐵蛋白(hTF)轉基因小鼠的乳腺上皮細胞,併進行體外原代培養.經胰蛋白酶純化後,繪製乳腺上皮細胞生長麯線；免疫組織化學方法檢測角蛋白18的錶達；透射電子顯微鏡(透射電鏡)觀察乳腺上皮細胞超微結構；流式細胞儀檢測細胞週期分佈；顯微鏡下分析乳腺上皮細胞覈型.將牛催乳素真覈錶達載體(pCMV-bPRL)轉染至轉基因乳腺上皮細胞中,檢測外源bPRL的錶達.結果 乳腺上皮細胞生長麯線呈“S”形；免疫熒光組織化學分析結果顯示hTF轉基因小鼠乳腺上皮細胞角蛋白18呈暘性錶達；透射電鏡觀察髮現乳腺上皮細胞胞覈較大、偏位,有雙覈或多覈,胞質豐富,空泡、粗麵內質網、高爾基體豐富；流式細胞儀檢測結果顯示:乳腺上皮細胞增殖活躍,G2/M期+S期細胞佔15％；細胞覈型分析結果顯示處于分裂期的細胞具有正常的二倍體,染色體完整.pCMV-bPRL轉染乳腺上皮細胞24 h後,上清液中檢測到bPRL的錶達.結論 體外培養的轉基因乳腺上皮細胞具有類似體內細胞的生物學特徵,併可錶達真覈錶達載體,為研究環境因素對乳腺功能的影響及製備乳腺生物反應器提供瞭一種細胞模型.
목적 건립전기인소서유선상피세포모형,위연구유선내배경인소조공외원기인적표체화제비고효표체외원기인적유선생물반응기제공연구평태.방법 통과궤계파쇄화효원매소화적방법획취인전철단백(hTF)전기인소서적유선상피세포,병진행체외원대배양.경이단백매순화후,회제유선상피세포생장곡선；면역조직화학방법검측각단백18적표체；투사전자현미경(투사전경)관찰유선상피세포초미결구；류식세포의검측세포주기분포；현미경하분석유선상피세포핵형.장우최유소진핵표체재체(pCMV-bPRL)전염지전기인유선상피세포중,검측외원bPRL적표체.결과 유선상피세포생장곡선정“S”형；면역형광조직화학분석결과현시hTF전기인소서유선상피세포각단백18정양성표체；투사전경관찰발현유선상피세포포핵교대、편위,유쌍핵혹다핵,포질봉부,공포、조면내질망、고이기체봉부；류식세포의검측결과현시:유선상피세포증식활약,G2/M기+S기세포점15％；세포핵형분석결과현시처우분렬기적세포구유정상적이배체,염색체완정.pCMV-bPRL전염유선상피세포24 h후,상청액중검측도bPRL적표체.결론 체외배양적전기인유선상피세포구유유사체내세포적생물학특정,병가표체진핵표체재체,위연구배경인소대유선공능적영향급제비유선생물반응기제공료일충세포모형.
