种子
種子
충자
SEED
2012年
6期
35-39
,共5页
许锦彪%段彪%邵园元%任贺春%杨海林%张鑫%赵华%曹云英%郎有忠
許錦彪%段彪%邵園元%任賀春%楊海林%張鑫%趙華%曹雲英%郎有忠
허금표%단표%소완원%임하춘%양해림%장흠%조화%조운영%랑유충
水稻%cDNA-AFLP%叶片%体系优化
水稻%cDNA-AFLP%葉片%體繫優化
수도%cDNA-AFLP%협편%체계우화
以高温和常温处理的水稻幼苗叶片为材料,对影响cDNA-AFLP分析体系的关键因素进行了分析,建立了适宜水稻的cDNA-AFLP分析体系,并得到了清晰可辨的cDNA-AFLP指纹图谱.结果表明:离心柱式试剂盒提取的RNA较完整,纯度较高；双链逆转录试剂盒形成的cDNA经EcoR Ⅰ (37℃,2h)和Mse Ⅰ (65℃,2h)完全酶切后,4℃连接过夜；20μL的体系中,连接产物稀释10倍液5.0μL作为预扩增的模板,并且预扩增反应的循环数为35,预扩增产物稀释20倍作为选择性扩增的模板,扩增结果较佳；6％ PAGE分离快速银染法显示,64对选择性扩增引物中筛选出多态生条带丰富的AFLP引物50对.本研究为利用cDNA-AFLP分析水稻抗高温基因进行深入的研究奠定了基础.
以高溫和常溫處理的水稻幼苗葉片為材料,對影響cDNA-AFLP分析體繫的關鍵因素進行瞭分析,建立瞭適宜水稻的cDNA-AFLP分析體繫,併得到瞭清晰可辨的cDNA-AFLP指紋圖譜.結果錶明:離心柱式試劑盒提取的RNA較完整,純度較高；雙鏈逆轉錄試劑盒形成的cDNA經EcoR Ⅰ (37℃,2h)和Mse Ⅰ (65℃,2h)完全酶切後,4℃連接過夜；20μL的體繫中,連接產物稀釋10倍液5.0μL作為預擴增的模闆,併且預擴增反應的循環數為35,預擴增產物稀釋20倍作為選擇性擴增的模闆,擴增結果較佳；6％ PAGE分離快速銀染法顯示,64對選擇性擴增引物中篩選齣多態生條帶豐富的AFLP引物50對.本研究為利用cDNA-AFLP分析水稻抗高溫基因進行深入的研究奠定瞭基礎.
이고온화상온처리적수도유묘협편위재료,대영향cDNA-AFLP분석체계적관건인소진행료분석,건립료괄의수도적cDNA-AFLP분석체계,병득도료청석가변적cDNA-AFLP지문도보.결과표명:리심주식시제합제취적RNA교완정,순도교고；쌍련역전록시제합형성적cDNA경EcoR Ⅰ (37℃,2h)화Mse Ⅰ (65℃,2h)완전매절후,4℃련접과야；20μL적체계중,련접산물희석10배액5.0μL작위예확증적모판,병차예확증반응적순배수위35,예확증산물희석20배작위선택성확증적모판,확증결과교가；6％ PAGE분리쾌속은염법현시,64대선택성확증인물중사선출다태생조대봉부적AFLP인물50대.본연구위이용cDNA-AFLP분석수도항고온기인진행심입적연구전정료기출.
