热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2003年
2期
142-145
,共4页
林勇平%吴淑华%杨英%汤郡%马桂璋
林勇平%吳淑華%楊英%湯郡%馬桂璋
림용평%오숙화%양영%탕군%마계장
LMP1%杆状病毒表达系统%昆虫细胞
LMP1%桿狀病毒錶達繫統%昆蟲細胞
LMP1%간상병독표체계통%곤충세포
目的构建EBV-LMP1基因的杆状病毒重组供体质粒,包装重组LMP1的杆状病毒,感染昆虫细胞进行表达.方法先将已克隆的LMP1 cDNA与线性化的pFASTBAcHTb进行连接,使pFASTBACHTb-LMP1与DH10BAc感受菌进行转座重组,利用抗性及蓝白斑筛选重组Bacmid/LMP1克隆,提取Bacmid/LMP1转染昆虫细胞Sf9包装杆状病毒,利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达,通过免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot检测表达情况.结果获得了重组LMP1的杆状病毒,细胞能表达出与LMP1单抗结合的蛋白,分子量为63kDa左右,细胞可直接分泌LMP1蛋白至上清.结论LMP1能在昆虫细胞中获得良好表达,为研究肿瘤疫苗及LMP1在EBV致瘤分子机理中的作用奠定了基础.
目的構建EBV-LMP1基因的桿狀病毒重組供體質粒,包裝重組LMP1的桿狀病毒,感染昆蟲細胞進行錶達.方法先將已剋隆的LMP1 cDNA與線性化的pFASTBAcHTb進行連接,使pFASTBACHTb-LMP1與DH10BAc感受菌進行轉座重組,利用抗性及藍白斑篩選重組Bacmid/LMP1剋隆,提取Bacmid/LMP1轉染昆蟲細胞Sf9包裝桿狀病毒,利用病毒感染Sf9細胞進行蛋白錶達,通過免疫熒光、SDS-PAGE和Western-blot檢測錶達情況.結果穫得瞭重組LMP1的桿狀病毒,細胞能錶達齣與LMP1單抗結閤的蛋白,分子量為63kDa左右,細胞可直接分泌LMP1蛋白至上清.結論LMP1能在昆蟲細胞中穫得良好錶達,為研究腫瘤疫苗及LMP1在EBV緻瘤分子機理中的作用奠定瞭基礎.
목적구건EBV-LMP1기인적간상병독중조공체질립,포장중조LMP1적간상병독,감염곤충세포진행표체.방법선장이극륭적LMP1 cDNA여선성화적pFASTBAcHTb진행련접,사pFASTBACHTb-LMP1여DH10BAc감수균진행전좌중조,이용항성급람백반사선중조Bacmid/LMP1극륭,제취Bacmid/LMP1전염곤충세포Sf9포장간상병독,이용병독감염Sf9세포진행단백표체,통과면역형광、SDS-PAGE화Western-blot검측표체정황.결과획득료중조LMP1적간상병독,세포능표체출여LMP1단항결합적단백,분자량위63kDa좌우,세포가직접분비LMP1단백지상청.결론LMP1능재곤충세포중획득량호표체,위연구종류역묘급LMP1재EBV치류분자궤리중적작용전정료기출.
