中国临床康复
中國臨床康複
중국림상강복
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATION
2005年
34期
26-28
,共3页
闫乃红%陈清英%曹桂群%卢亦路%张发强%袁琼兰%夏庆杰
閆迺紅%陳清英%曹桂群%盧亦路%張髮彊%袁瓊蘭%夏慶傑
염내홍%진청영%조계군%로역로%장발강%원경란%하경걸
神经系统%干细胞%脑源性神经营养因子%病毒
神經繫統%榦細胞%腦源性神經營養因子%病毒
신경계통%간세포%뇌원성신경영양인자%병독
目的:构建大鼠胶质细胞源性神经营养因子基因的重组腺病毒并观察其在神经干细胞上的表达,探索胶质细胞源性神经营养因子作为基因治疗神经病变的价值.方法:实验于2004-8/12在四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室进行.以新生SD大鼠大脑皮层细胞RNA为模板,反转录聚合酶链反应扩增出全长的胶质细胞源性神经营养因子基因,经测序验证后,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack CMV中,与骨架质粒pAdEasy 1同源重组为腺病毒载体.线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达,并用病毒上清转化大鼠神经干细胞,检测胶质细胞源性神经营养因子基因的表达.结果:①胶质细胞源性神经营养因子基因扩增后进行测序显示扩增片段为653 bp个核苷酸,同源性比较该序列正确.②重组腺病毒载体经酶切验证为阳性克隆,转染293细胞包装后的病毒滴度为1x109PFU/mL.③转入胶质细胞源性神经营养因子的重组腺病毒的神经于细胞扩增出653 bp的带.结论:成功构建了胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒并见其在大鼠神经干细胞中进行了表达.
目的:構建大鼠膠質細胞源性神經營養因子基因的重組腺病毒併觀察其在神經榦細胞上的錶達,探索膠質細胞源性神經營養因子作為基因治療神經病變的價值.方法:實驗于2004-8/12在四川大學華西醫院眼疾病分子遺傳實驗室進行.以新生SD大鼠大腦皮層細胞RNA為模闆,反轉錄聚閤酶鏈反應擴增齣全長的膠質細胞源性神經營養因子基因,經測序驗證後,亞剋隆至穿梭質粒pAdTrack CMV中,與骨架質粒pAdEasy 1同源重組為腺病毒載體.線形化後轉染293細胞進行包裝擴增,利用AdEasy1繫統上的綠色熒光蛋白鑒定病毒錶達,併用病毒上清轉化大鼠神經榦細胞,檢測膠質細胞源性神經營養因子基因的錶達.結果:①膠質細胞源性神經營養因子基因擴增後進行測序顯示擴增片段為653 bp箇覈苷痠,同源性比較該序列正確.②重組腺病毒載體經酶切驗證為暘性剋隆,轉染293細胞包裝後的病毒滴度為1x109PFU/mL.③轉入膠質細胞源性神經營養因子的重組腺病毒的神經于細胞擴增齣653 bp的帶.結論:成功構建瞭膠質細胞源性神經營養因子重組腺病毒併見其在大鼠神經榦細胞中進行瞭錶達.
목적:구건대서효질세포원성신경영양인자기인적중조선병독병관찰기재신경간세포상적표체,탐색효질세포원성신경영양인자작위기인치료신경병변적개치.방법:실험우2004-8/12재사천대학화서의원안질병분자유전실험실진행.이신생SD대서대뇌피층세포RNA위모판,반전록취합매련반응확증출전장적효질세포원성신경영양인자기인,경측서험증후,아극륭지천사질립pAdTrack CMV중,여골가질립pAdEasy 1동원중조위선병독재체.선형화후전염293세포진행포장확증,이용AdEasy1계통상적록색형광단백감정병독표체,병용병독상청전화대서신경간세포,검측효질세포원성신경영양인자기인적표체.결과:①효질세포원성신경영양인자기인확증후진행측서현시확증편단위653 bp개핵감산,동원성비교해서렬정학.②중조선병독재체경매절험증위양성극륭,전염293세포포장후적병독적도위1x109PFU/mL.③전입효질세포원성신경영양인자적중조선병독적신경우세포확증출653 bp적대.결론:성공구건료효질세포원성신경영양인자중조선병독병견기재대서신경간세포중진행료표체.
