畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2007年
5期
493-499
,共7页
陈祥%刘静%苗晓青%王晓泉%高崧%焦新安%刘秀梵
陳祥%劉靜%苗曉青%王曉泉%高崧%焦新安%劉秀梵
진상%류정%묘효청%왕효천%고숭%초신안%류수범
禽病原性大肠杆菌%同源重组%温度敏感性血凝素%突变体
禽病原性大腸桿菌%同源重組%溫度敏感性血凝素%突變體
금병원성대장간균%동원중조%온도민감성혈응소%돌변체
运用基因重组方法将庆大霉素(Gentamycin,GM)抗性基因连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下此tshF-GM-tshR片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建出自杀性载体pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到含tsh基因的受体APEC E037株中,根据同源重组原理,筛选出tsh基因缺失的E037突变株,命名为E037(Δtsh).E037和E037(Δtsh)株对1日龄鸡的LD50分别为105.6CFU和109.0CFU,动物感染性试验表明E037(Δtsh)株在内脏器官和血液中的感染能力和大肠杆菌病变程度均有明显下降.在243株禽源分离株中,有167株为tsh+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4%(146/167)、12.6%(21/1 67)和0%(0/167);O1、O2和O78血清型的高致病株占所在血清型分离株的89.5%～100%,而其它血清型的高致病株仅占其它分离株的53.3%,差异极显著(P＜0.01).结果显示tsh+株大多数为高致病性菌株,且其致病性与血清型的种类有一定的相关性,温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子.
運用基因重組方法將慶大黴素(Gentamycin,GM)抗性基因連接到PCR擴增的tsh兩耑區域產生的2箇目的基因片段之間,併共同插入到pUC18載體的多剋隆位點中,構建齣帶GM標誌的載體pUC18-tshFRGM,從中切下此tshF-GM-tshR片段,再將之剋隆到pMEG-375自殺性載體中,構建齣自殺性載體pMEG375-tshFRGM,將突變載體轉化到含tsh基因的受體APEC E037株中,根據同源重組原理,篩選齣tsh基因缺失的E037突變株,命名為E037(Δtsh).E037和E037(Δtsh)株對1日齡鷄的LD50分彆為105.6CFU和109.0CFU,動物感染性試驗錶明E037(Δtsh)株在內髒器官和血液中的感染能力和大腸桿菌病變程度均有明顯下降.在243株禽源分離株中,有167株為tsh+菌株,其中高緻病株、中等緻病株和低緻病株分彆為87.4%(146/167)、12.6%(21/1 67)和0%(0/167);O1、O2和O78血清型的高緻病株佔所在血清型分離株的89.5%～100%,而其它血清型的高緻病株僅佔其它分離株的53.3%,差異極顯著(P＜0.01).結果顯示tsh+株大多數為高緻病性菌株,且其緻病性與血清型的種類有一定的相關性,溫度敏感性血凝素為APEC重要的緻病因子.
운용기인중조방법장경대매소(Gentamycin,GM)항성기인련접도PCR확증적tsh량단구역산생적2개목적기인편단지간,병공동삽입도pUC18재체적다극륭위점중,구건출대GM표지적재체pUC18-tshFRGM,종중절하차tshF-GM-tshR편단,재장지극륭도pMEG-375자살성재체중,구건출자살성재체pMEG375-tshFRGM,장돌변재체전화도함tsh기인적수체APEC E037주중,근거동원중조원리,사선출tsh기인결실적E037돌변주,명명위E037(Δtsh).E037화E037(Δtsh)주대1일령계적LD50분별위105.6CFU화109.0CFU,동물감염성시험표명E037(Δtsh)주재내장기관화혈액중적감염능력화대장간균병변정도균유명현하강.재243주금원분리주중,유167주위tsh+균주,기중고치병주、중등치병주화저치병주분별위87.4%(146/167)、12.6%(21/1 67)화0%(0/167);O1、O2화O78혈청형적고치병주점소재혈청형분리주적89.5%～100%,이기타혈청형적고치병주부점기타분리주적53.3%,차이겁현저(P＜0.01).결과현시tsh+주대다수위고치병성균주,차기치병성여혈청형적충류유일정적상관성,온도민감성혈응소위APEC중요적치병인자.
