中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2008年
2期
124-127
,共4页
姚利晓%陶丽红%杨冠珍%吴祥甫%蔡幼民%林矫矫
姚利曉%陶麗紅%楊冠珍%吳祥甫%蔡幼民%林矯矯
요리효%도려홍%양관진%오상보%채유민%림교교
日本血吸虫%SjPP%Bac-to-Bac杆状病毒表达系统
日本血吸蟲%SjPP%Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統
일본혈흡충%SjPP%Bac-to-Bac간상병독표체계통
目的 在昆虫细胞中表达获得可溶性的日本血吸虫SjPP重组蛋白.方法 提取日本血吸虫成虫总RNA,通过RT-PCR扩增出SjPP基因的编码区序列,将其定向克隆到供体质粒pFastBac HT-B中,构建重组杆状病毒供体质粒pFastBac-SjPP,转化人大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组杆粒Bacmid-SjPP,用阳离子脂质体法转染粉纹夜蛾(TN5B1-4)细胞.利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况.结果 构建了含日本血吸虫SjPP基因的重组杆粒Bacmid-SjPP,转染TN5B1-4细胞后,获得有感染力的重组杆状病毒,并在TN581-4细胞中成功表达SjPP蛋白.该重组蛋白可被抗SjPP蛋白的兔血清识别.结论 成功构建SjPP基因重组杆状病毒,并在TN581-4细胞中表达,该蛋白具有良好的抗原性.
目的 在昆蟲細胞中錶達穫得可溶性的日本血吸蟲SjPP重組蛋白.方法 提取日本血吸蟲成蟲總RNA,通過RT-PCR擴增齣SjPP基因的編碼區序列,將其定嚮剋隆到供體質粒pFastBac HT-B中,構建重組桿狀病毒供體質粒pFastBac-SjPP,轉化人大腸埃希菌DH10Bac進行轉座,提取重組桿粒Bacmid-SjPP,用暘離子脂質體法轉染粉紋夜蛾(TN5B1-4)細胞.利用十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質印跡(Western blotting)分析重組蛋白錶達情況.結果 構建瞭含日本血吸蟲SjPP基因的重組桿粒Bacmid-SjPP,轉染TN5B1-4細胞後,穫得有感染力的重組桿狀病毒,併在TN581-4細胞中成功錶達SjPP蛋白.該重組蛋白可被抗SjPP蛋白的兔血清識彆.結論 成功構建SjPP基因重組桿狀病毒,併在TN581-4細胞中錶達,該蛋白具有良好的抗原性.
목적 재곤충세포중표체획득가용성적일본혈흡충SjPP중조단백.방법 제취일본혈흡충성충총RNA,통과RT-PCR확증출SjPP기인적편마구서렬,장기정향극륭도공체질립pFastBac HT-B중,구건중조간상병독공체질립pFastBac-SjPP,전화인대장애희균DH10Bac진행전좌,제취중조간립Bacmid-SjPP,용양리자지질체법전염분문야아(TN5B1-4)세포.이용십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화단백질인적(Western blotting)분석중조단백표체정황.결과 구건료함일본혈흡충SjPP기인적중조간립Bacmid-SjPP,전염TN5B1-4세포후,획득유감염력적중조간상병독,병재TN581-4세포중성공표체SjPP단백.해중조단백가피항SjPP단백적토혈청식별.결론 성공구건SjPP기인중조간상병독,병재TN581-4세포중표체,해단백구유량호적항원성.
