CAJ | 학술논문

[目的]为了培养用于X-衍射的酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ的蛋白晶体,为研究该酶的三维结构和功能打下基础;[方法]构建了表达酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段(Apaldn16)的表达质粒,用核苷酸序列分析证明了克隆片段的正确性.将重组载体转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),经.IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测了蛋白的表达情况.将粗蛋白用Ni-NTA亲和层析分离,收集组分进一步用Superdex 75分子筛纯化.纯化后的蛋白用SDS-PAGE和质谱检验其纯度和正确性,然后用悬滴气相扩散法进行了蛋白结晶条件的初筛.[结果]成功地用大肠杆菌可溶性地高效表达了Apaldn16蛋白.得到了分子量约为36 kD的单一蛋白条带,纯度在95%以上.质谱结果证明该蛋白纯度高,分子量正确.将纯化后的蛋白用悬滴气相扩散法进行晶体初筛,得到了针状簇晶.此晶体经SDS-PAGE检测,证明为Apaldn16蛋白晶体.[结论]利用大肠杆菌高效表达体系可以正确表达Apalan16蛋白,蛋白经过纯化后,用悬滴气相扩散法可以生长出针状晶体,适合于进一步的三维结构研究.
[목적]위료배양용우X-연사적양주효모이선감사린산린산해매Ⅰ적단백정체,위연구해매적삼유결구화공능타하기출;[방법]구건료표체양주효모이선감사린산린산해매Ⅰ편단(Apaldn16)적표체질립,용핵감산서렬분석증명료극륭편단적정학성.장중조재체전화대장간균표체균주BL21(DE3),경.IPTG유도후,용SDS-PAGE검측료단백적표체정황.장조단백용Ni-NTA친화층석분리,수집조분진일보용Superdex 75분자사순화.순화후적단백용SDS-PAGE화질보검험기순도화정학성,연후용현적기상확산법진행료단백결정조건적초사.[결과]성공지용대장간균가용성지고효표체료Apaldn16단백.득도료분자량약위36 kD적단일단백조대,순도재95%이상.질보결과증명해단백순도고,분자량정학.장순화후적단백용현적기상확산법진행정체초사,득도료침상족정.차정체경SDS-PAGE검측,증명위Apaldn16단백정체.[결론]이용대장간균고효표체체계가이정학표체Apalan16단백,단백경과순화후,용현적기상확산법가이생장출침상정체,괄합우진일보적삼유결구연구.