中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2009年
8期
804-809
,共6页
曹丽艳%张德林%张燕丽%芦谮%蔡志杰%王艳华%赵晋军
曹麗豔%張德林%張燕麗%蘆譖%蔡誌傑%王豔華%趙晉軍
조려염%장덕림%장연려%호참%채지걸%왕염화%조진군
弓形虫%表面抗原1%克隆表达%抗原性分析
弓形蟲%錶麵抗原1%剋隆錶達%抗原性分析
궁형충%표면항원1%극륭표체%항원성분석
目的 构建弓形虫 GJS 株表面抗原 1(SAG1) 重组表达质粒,研究 SAG1 蛋白疫苗诱导的保护性免疫作用.方法 根据 RH 株弓形虫 SAG1 基因序列设计 1 对引物,利用 PCR 方法 获得 SAG1 基因,克隆入 pMD18-T 载体,测序后进行序列分析;重新设计引物将其亚克隆至原核表达载体 pET-30a 中,在大肠杆菌中经 IPTG 诱导表达;重组抗原经纯化和复性后免疫小鼠,ELISA 法测定其抗体滴度的变化,并用弓形虫速殖子攻击检测免疫保护力.结果 与已知的 SAG1 基因核苷酸序列 (S76248) 及其编码氨基酸序列的同源性分别为 99%、97%;表达的 SAG1蛋白以包涵体形式存在,该重组抗原能被羊抗弓形虫阳性血清所识别;经间接 ELISA 检测,小鼠免疫后产生了较高的抗体;动物保护性实验表明,虽然与对照组相比免疫组小鼠存活时间有一定的延长,但差异无显著性.结论 成功构建了弓形虫SAG1重组表达质粒,SAG1 蛋白疫苗诱导小鼠的免疫保护力不强.
目的 構建弓形蟲 GJS 株錶麵抗原 1(SAG1) 重組錶達質粒,研究 SAG1 蛋白疫苗誘導的保護性免疫作用.方法 根據 RH 株弓形蟲 SAG1 基因序列設計 1 對引物,利用 PCR 方法 穫得 SAG1 基因,剋隆入 pMD18-T 載體,測序後進行序列分析;重新設計引物將其亞剋隆至原覈錶達載體 pET-30a 中,在大腸桿菌中經 IPTG 誘導錶達;重組抗原經純化和複性後免疫小鼠,ELISA 法測定其抗體滴度的變化,併用弓形蟲速殖子攻擊檢測免疫保護力.結果 與已知的 SAG1 基因覈苷痠序列 (S76248) 及其編碼氨基痠序列的同源性分彆為 99%、97%;錶達的 SAG1蛋白以包涵體形式存在,該重組抗原能被羊抗弓形蟲暘性血清所識彆;經間接 ELISA 檢測,小鼠免疫後產生瞭較高的抗體;動物保護性實驗錶明,雖然與對照組相比免疫組小鼠存活時間有一定的延長,但差異無顯著性.結論 成功構建瞭弓形蟲SAG1重組錶達質粒,SAG1 蛋白疫苗誘導小鼠的免疫保護力不彊.
목적 구건궁형충 GJS 주표면항원 1(SAG1) 중조표체질립,연구 SAG1 단백역묘유도적보호성면역작용.방법 근거 RH 주궁형충 SAG1 기인서렬설계 1 대인물,이용 PCR 방법 획득 SAG1 기인,극륭입 pMD18-T 재체,측서후진행서렬분석;중신설계인물장기아극륭지원핵표체재체 pET-30a 중,재대장간균중경 IPTG 유도표체;중조항원경순화화복성후면역소서,ELISA 법측정기항체적도적변화,병용궁형충속식자공격검측면역보호력.결과 여이지적 SAG1 기인핵감산서렬 (S76248) 급기편마안기산서렬적동원성분별위 99%、97%;표체적 SAG1단백이포함체형식존재,해중조항원능피양항궁형충양성혈청소식별;경간접 ELISA 검측,소서면역후산생료교고적항체;동물보호성실험표명,수연여대조조상비면역조소서존활시간유일정적연장,단차이무현저성.결론 성공구건료궁형충SAG1중조표체질립,SAG1 단백역묘유도소서적면역보호력불강.
