中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
40期
7908-7912
,共5页
脐带间充质干细胞%再生障碍性贫血%T淋巴细胞%免疫调节
臍帶間充質榦細胞%再生障礙性貧血%T淋巴細胞%免疫調節
제대간충질간세포%재생장애성빈혈%T림파세포%면역조절
背景:间充质干细胞具有免疫调节作用,能降低移植后移植物抗宿主病的发生率,治疗自身免疫性疾病.目的:观察人脐带间充质干细胞对再生障碍性贫血患者骨髓T淋巴细胞的免疫调节作用.设计、时间及地点:随机分组设计,体外细胞学对比观察,病例来自2007-09/2008-11南昌大学第一附属医院、南昌大学第二附属医院血液科.实验于2007-09/2008-11在南昌大学第二附属医院血液研究所完成.对象/材料:选择南昌大学第一附属医院、南昌大学第二附属医院血液科收治的初诊再生障碍性贫血患者22例,其中重型再障6例,男3例,女3例,中位年龄38(16～68)岁;慢性再障16例,男9例,女7例,中位年龄41(25～59)岁.另获取临床正常剖宫产之足月健康胎儿脐带,用于人脐带间充质干细胞的分离、培养和鉴定.方法:从人脐带中提取并培养间充质干细胞;用密度梯度离心法从再生障碍性贫血患者骨髓中分离T淋巴细胞;将两者共培养,实验分为3组,对照组:单独培养T淋巴细胞,细胞密度1×105/孔;人脐带间充质干细胞组:按1×105/孔,0.5×105/孔、0.1×105/孔、0.05×105/孔不同密度接种人脐带间充质干细胞;实验组:T淋巴细胞与人脐带间充质干细胞按不同比例1:1、1:0.5、1:0.1、1:0.05接种于培养基内.主要观察指标:四甲基偶氮唑盐法检测不同细胞浓度人脐带间充质干细胞对再生障碍性贫血患者淋巴细胞的抑制率;利用流式细胞仪检测T细胞亚群CD4+/CD8+的变化;采用ELISA法测定上清液中造血负调控因子细胞介素2、γ-干扰素的水平.结果:①用贴壁法培养至第2代的间充质干细胞具有长梭形的典型改变,表面分子检测显示高表达CD166、CD29、CD54,低表达CD13、CD34、CD45,经体外诱导可分化为脂肪细胞.②实验组中人脐带间充质干细胞:淋巴细胞比例分别为1:1、0.5:1、0.1:1时间充质干细胞能够抑制再生障碍性贫血患者淋巴细胞的增殖,抑制率分别为(56.2±12.1)%、(43.7±10.4)%、(28.6±8.9)%,1:1组抑制作用最强.⑧人脐带间充质干细胞能够调整再生障碍性贫血患者倒置的CD4+/CD8+比例,抑制再生障碍性贫血患者造血负调控因子白细胞介素2、γ-干扰素分泌水平.结论:人脐带间充质干细胞在体外对再生障碍性贫血患者T淋巴细胞具有免疫调节作用,这种作用依赖于间充质干细胞数量.
揹景:間充質榦細胞具有免疫調節作用,能降低移植後移植物抗宿主病的髮生率,治療自身免疫性疾病.目的:觀察人臍帶間充質榦細胞對再生障礙性貧血患者骨髓T淋巴細胞的免疫調節作用.設計、時間及地點:隨機分組設計,體外細胞學對比觀察,病例來自2007-09/2008-11南昌大學第一附屬醫院、南昌大學第二附屬醫院血液科.實驗于2007-09/2008-11在南昌大學第二附屬醫院血液研究所完成.對象/材料:選擇南昌大學第一附屬醫院、南昌大學第二附屬醫院血液科收治的初診再生障礙性貧血患者22例,其中重型再障6例,男3例,女3例,中位年齡38(16～68)歲;慢性再障16例,男9例,女7例,中位年齡41(25～59)歲.另穫取臨床正常剖宮產之足月健康胎兒臍帶,用于人臍帶間充質榦細胞的分離、培養和鑒定.方法:從人臍帶中提取併培養間充質榦細胞;用密度梯度離心法從再生障礙性貧血患者骨髓中分離T淋巴細胞;將兩者共培養,實驗分為3組,對照組:單獨培養T淋巴細胞,細胞密度1×105/孔;人臍帶間充質榦細胞組:按1×105/孔,0.5×105/孔、0.1×105/孔、0.05×105/孔不同密度接種人臍帶間充質榦細胞;實驗組:T淋巴細胞與人臍帶間充質榦細胞按不同比例1:1、1:0.5、1:0.1、1:0.05接種于培養基內.主要觀察指標:四甲基偶氮唑鹽法檢測不同細胞濃度人臍帶間充質榦細胞對再生障礙性貧血患者淋巴細胞的抑製率;利用流式細胞儀檢測T細胞亞群CD4+/CD8+的變化;採用ELISA法測定上清液中造血負調控因子細胞介素2、γ-榦擾素的水平.結果:①用貼壁法培養至第2代的間充質榦細胞具有長梭形的典型改變,錶麵分子檢測顯示高錶達CD166、CD29、CD54,低錶達CD13、CD34、CD45,經體外誘導可分化為脂肪細胞.②實驗組中人臍帶間充質榦細胞:淋巴細胞比例分彆為1:1、0.5:1、0.1:1時間充質榦細胞能夠抑製再生障礙性貧血患者淋巴細胞的增殖,抑製率分彆為(56.2±12.1)%、(43.7±10.4)%、(28.6±8.9)%,1:1組抑製作用最彊.⑧人臍帶間充質榦細胞能夠調整再生障礙性貧血患者倒置的CD4+/CD8+比例,抑製再生障礙性貧血患者造血負調控因子白細胞介素2、γ-榦擾素分泌水平.結論:人臍帶間充質榦細胞在體外對再生障礙性貧血患者T淋巴細胞具有免疫調節作用,這種作用依賴于間充質榦細胞數量.
배경:간충질간세포구유면역조절작용,능강저이식후이식물항숙주병적발생솔,치료자신면역성질병.목적:관찰인제대간충질간세포대재생장애성빈혈환자골수T림파세포적면역조절작용.설계、시간급지점:수궤분조설계,체외세포학대비관찰,병례래자2007-09/2008-11남창대학제일부속의원、남창대학제이부속의원혈액과.실험우2007-09/2008-11재남창대학제이부속의원혈액연구소완성.대상/재료:선택남창대학제일부속의원、남창대학제이부속의원혈액과수치적초진재생장애성빈혈환자22례,기중중형재장6례,남3례,녀3례,중위년령38(16～68)세;만성재장16례,남9례,녀7례,중위년령41(25～59)세.령획취림상정상부궁산지족월건강태인제대,용우인제대간충질간세포적분리、배양화감정.방법:종인제대중제취병배양간충질간세포;용밀도제도리심법종재생장애성빈혈환자골수중분리T림파세포;장량자공배양,실험분위3조,대조조:단독배양T림파세포,세포밀도1×105/공;인제대간충질간세포조:안1×105/공,0.5×105/공、0.1×105/공、0.05×105/공불동밀도접충인제대간충질간세포;실험조:T림파세포여인제대간충질간세포안불동비례1:1、1:0.5、1:0.1、1:0.05접충우배양기내.주요관찰지표:사갑기우담서염법검측불동세포농도인제대간충질간세포대재생장애성빈혈환자림파세포적억제솔;이용류식세포의검측T세포아군CD4+/CD8+적변화;채용ELISA법측정상청액중조혈부조공인자세포개소2、γ-간우소적수평.결과:①용첩벽법배양지제2대적간충질간세포구유장사형적전형개변,표면분자검측현시고표체CD166、CD29、CD54,저표체CD13、CD34、CD45,경체외유도가분화위지방세포.②실험조중인제대간충질간세포:림파세포비례분별위1:1、0.5:1、0.1:1시간충질간세포능구억제재생장애성빈혈환자림파세포적증식,억제솔분별위(56.2±12.1)%、(43.7±10.4)%、(28.6±8.9)%,1:1조억제작용최강.⑧인제대간충질간세포능구조정재생장애성빈혈환자도치적CD4+/CD8+비례,억제재생장애성빈혈환자조혈부조공인자백세포개소2、γ-간우소분비수평.결론:인제대간충질간세포재체외대재생장애성빈혈환자T림파세포구유면역조절작용,저충작용의뢰우간충질간세포수량.
