武汉大学学报(理学版)
武漢大學學報(理學版)
무한대학학보(이학판)
JOURNAL OF WUHAN UNIVERSITY(Natural Science Edition)
2004年
6期
765-768
,共4页
李宝宗%郑竑%叶林柏%郜金荣%佘应龙%贺石汉%吴正辉
李寶宗%鄭竑%葉林柏%郜金榮%佘應龍%賀石漢%吳正輝
리보종%정횡%협림백%고금영%사응룡%하석한%오정휘
组织型纤溶酶原激活物%克隆%表达%活性比较
組織型纖溶酶原激活物%剋隆%錶達%活性比較
조직형섬용매원격활물%극륭%표체%활성비교
将重组基因rtPA及其突变体rtPAm分别克隆到原核表达载体pET-his上,通过平板筛选,双酶切和PCR鉴定获得阳性克隆子,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).经IPTG诱导,表达出的两种tPA蛋白都形成不可溶的包涵体.SDS-PAGE结果显示两种tPA蛋白分子量为4.0×104左右,表达产量较高.包涵体经尿素变性,透析复性后柱层析纯化,纤溶平板法测定激活纤溶蛋白酶的活性,结果显示rtPAm比活性比rtPA高70%左右.
將重組基因rtPA及其突變體rtPAm分彆剋隆到原覈錶達載體pET-his上,通過平闆篩選,雙酶切和PCR鑒定穫得暘性剋隆子,重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3).經IPTG誘導,錶達齣的兩種tPA蛋白都形成不可溶的包涵體.SDS-PAGE結果顯示兩種tPA蛋白分子量為4.0×104左右,錶達產量較高.包涵體經尿素變性,透析複性後柱層析純化,纖溶平闆法測定激活纖溶蛋白酶的活性,結果顯示rtPAm比活性比rtPA高70%左右.
장중조기인rtPA급기돌변체rtPAm분별극륭도원핵표체재체pET-his상,통과평판사선,쌍매절화PCR감정획득양성극륭자,중조질립전화대장간균BL21(DE3).경IPTG유도,표체출적량충tPA단백도형성불가용적포함체.SDS-PAGE결과현시량충tPA단백분자량위4.0×104좌우,표체산량교고.포함체경뇨소변성,투석복성후주층석순화,섬용평판법측정격활섬용단백매적활성,결과현시rtPAm비활성비rtPA고70%좌우.
