CAJ | 학술논문

目的:获取原核表达的可溶性HLA-G1重链分子(heavy chain of soluble HLA-G1,sHLA-G1-hc),为进一步构建可溶性HLA-G1单体分子奠定基础.方法:应用引物点突变技术,RT-PCR扩增去信号肽的可溶性HLA-G1重链分子的cDNA序列,构建表达载体pET22b/sHLA-G1-hc,导入大肠杆菌BL21(DE3)plys,IPTG诱导sHLA-G1-hc-6(his融合蛋白表达,提取包涵体蛋白,溶解后经Ni-NTA亲和层析纯化,透析后浓缩保存.SDS-PAGE、Western blot鉴定目的蛋白的表达和纯化.结果:克隆基因序列符合重链基因特征;表达产物以包涵体形式为主,表达量占菌体总蛋白的20%;纯化后证明表达产物具有较高纯度达到95%.结论:成功构建可溶性HLA-G1重链分子原核表达载体,为阐明可溶性HLA-G1的功能奠定基础.
목적:획취원핵표체적가용성HLA-G1중련분자(heavy chain of soluble HLA-G1,sHLA-G1-hc),위진일보구건가용성HLA-G1단체분자전정기출.방법:응용인물점돌변기술,RT-PCR확증거신호태적가용성HLA-G1중련분자적cDNA서렬,구건표체재체pET22b/sHLA-G1-hc,도입대장간균BL21(DE3)plys,IPTG유도sHLA-G1-hc-6(his융합단백표체,제취포함체단백,용해후경Ni-NTA친화층석순화,투석후농축보존.SDS-PAGE、Western blot감정목적단백적표체화순화.결과:극륭기인서렬부합중련기인특정;표체산물이포함체형식위주,표체량점균체총단백적20%;순화후증명표체산물구유교고순도체도95%.결론:성공구건가용성HLA-G1중련분자원핵표체재체,위천명가용성HLA-G1적공능전정기출.