中山大学学报（自然科学版）
中山大學學報（自然科學版）
중산대학학보（자연과학판）
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI
2005年
6期
71-74,78
,共5页
李剑峰%周惠%徐增富%李凝%屈良鹄
李劍峰%週惠%徐增富%李凝%屈良鵠
리검봉%주혜%서증부%리응%굴량곡
番茄%ACC合酶%GST融合表达%可溶性%纯化%酶活
番茄%ACC閤酶%GST融閤錶達%可溶性%純化%酶活
번가%ACC합매%GST융합표체%가용성%순화%매활
植物激素乙烯参与了植物生长发育等一系列生理过程,通过控制乙烯的合成进而控制经济作物的衰老和果实的成熟,给农业带来深远影响.ACC合酶是高等植物乙烯生物合成的限速酶.通过RT-PCR将番茄ACC合酶(LeACS2)cDNA克隆至大肠杆菌表达载体pET30a中并使之与GST 编码序列进行融合而构建了重组表达质粒pET-LeACS2-GST.转化获得含有该重组表达质粒的大肠杆菌BL21 starTM(DE3) pLysS细胞,在IPTG的诱导下成功表达出含有LeACS2的大小约83 000的融合蛋白.该融合蛋白具有较好的可溶性.通过GST亲和层析和MonoQ阴离子交换两步纯化后的LeACS2能够催化其底物SAM生成ACC.
植物激素乙烯參與瞭植物生長髮育等一繫列生理過程,通過控製乙烯的閤成進而控製經濟作物的衰老和果實的成熟,給農業帶來深遠影響.ACC閤酶是高等植物乙烯生物閤成的限速酶.通過RT-PCR將番茄ACC閤酶(LeACS2)cDNA剋隆至大腸桿菌錶達載體pET30a中併使之與GST 編碼序列進行融閤而構建瞭重組錶達質粒pET-LeACS2-GST.轉化穫得含有該重組錶達質粒的大腸桿菌BL21 starTM(DE3) pLysS細胞,在IPTG的誘導下成功錶達齣含有LeACS2的大小約83 000的融閤蛋白.該融閤蛋白具有較好的可溶性.通過GST親和層析和MonoQ陰離子交換兩步純化後的LeACS2能夠催化其底物SAM生成ACC.
식물격소을희삼여료식물생장발육등일계렬생리과정,통과공제을희적합성진이공제경제작물적쇠로화과실적성숙,급농업대래심원영향.ACC합매시고등식물을희생물합성적한속매.통과RT-PCR장번가ACC합매(LeACS2)cDNA극륭지대장간균표체재체pET30a중병사지여GST 편마서렬진행융합이구건료중조표체질립pET-LeACS2-GST.전화획득함유해중조표체질립적대장간균BL21 starTM(DE3) pLysS세포,재IPTG적유도하성공표체출함유LeACS2적대소약83 000적융합단백.해융합단백구유교호적가용성.통과GST친화층석화MonoQ음리자교환량보순화후적LeACS2능구최화기저물SAM생성ACC.
