中华耳科学杂志
中華耳科學雜誌
중화이과학잡지
CHINESE JOURNAL OF OTOLOGY
2008年
2期
228-232
,共5页
李隽%杨阳%孔维佳%胡钰娟
李雋%楊暘%孔維佳%鬍鈺娟
리준%양양%공유가%호옥연
血管纹%缘细胞%重组2型腺相关病毒%锰超氧化物歧化酶%转染
血管紋%緣細胞%重組2型腺相關病毒%錳超氧化物歧化酶%轉染
혈관문%연세포%중조2형선상관병독%맹초양화물기화매%전염
目的 探讨以重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus of the serotypes 2,rAAV2)为载体对体外培养的大鼠耳蜗血管纹缘细胞(Marginal cells,MCs)转染锰超氧化物歧化酶(Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD),获得高表达MnSOD转基因缘细胞的可行性.方法 实验组按感染复数(MOI)为104v.g./cell对体外培养的血管纹缘细胞转染rAAV2-MnSOD-EGFP,同时设转染rAAV2-EGFP缘细胞作为空载对照组.未转染细胞为空白对照组.荧光显微镜下每2d观察1次MCs的绿色荧光蛋白(Enhenced green fluorescent protein,EGFP)表达情况.比色法测定各组MCs的MnSOD活性.激光共聚焦显微镜下观察转染rAAV2-MnSOD-EGFP后MnSOD的表达,免疫印迹法(Western blot)定量分析MnSOD的表达.结果 (1) 各组MCs转染后,生长正常,空载对照组MCs转染rAAV2-EGFP后2天开始出现微弱EGFP的表达.1周后至高峰;实验组转染rAAV2-MnSOD-EGFP后4 d出现EGFP的表达,10 d至高峰,且持续表达于细胞培养的整个期间.EGFP的表达在荧光显微镜490 nm波长激发光下呈黄绿色,弥漫于整个胞质.(2)对激光共聚焦显微镜及Western blot的检测结果进行分析,实验组较空载对照组和空白对照组的MCs中MnSOD的表达明显升高.差异有统计学意义.结论 rAAV2-MnSOD-EGFP能有效地转染体外培养的MCs并持续高表达MnSOD.
目的 探討以重組腺相關病毒(Recombinant adeno-associated virus of the serotypes 2,rAAV2)為載體對體外培養的大鼠耳蝸血管紋緣細胞(Marginal cells,MCs)轉染錳超氧化物歧化酶(Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD),穫得高錶達MnSOD轉基因緣細胞的可行性.方法 實驗組按感染複數(MOI)為104v.g./cell對體外培養的血管紋緣細胞轉染rAAV2-MnSOD-EGFP,同時設轉染rAAV2-EGFP緣細胞作為空載對照組.未轉染細胞為空白對照組.熒光顯微鏡下每2d觀察1次MCs的綠色熒光蛋白(Enhenced green fluorescent protein,EGFP)錶達情況.比色法測定各組MCs的MnSOD活性.激光共聚焦顯微鏡下觀察轉染rAAV2-MnSOD-EGFP後MnSOD的錶達,免疫印跡法(Western blot)定量分析MnSOD的錶達.結果 (1) 各組MCs轉染後,生長正常,空載對照組MCs轉染rAAV2-EGFP後2天開始齣現微弱EGFP的錶達.1週後至高峰;實驗組轉染rAAV2-MnSOD-EGFP後4 d齣現EGFP的錶達,10 d至高峰,且持續錶達于細胞培養的整箇期間.EGFP的錶達在熒光顯微鏡490 nm波長激髮光下呈黃綠色,瀰漫于整箇胞質.(2)對激光共聚焦顯微鏡及Western blot的檢測結果進行分析,實驗組較空載對照組和空白對照組的MCs中MnSOD的錶達明顯升高.差異有統計學意義.結論 rAAV2-MnSOD-EGFP能有效地轉染體外培養的MCs併持續高錶達MnSOD.
목적 탐토이중조선상관병독(Recombinant adeno-associated virus of the serotypes 2,rAAV2)위재체대체외배양적대서이와혈관문연세포(Marginal cells,MCs)전염맹초양화물기화매(Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD),획득고표체MnSOD전기인연세포적가행성.방법 실험조안감염복수(MOI)위104v.g./cell대체외배양적혈관문연세포전염rAAV2-MnSOD-EGFP,동시설전염rAAV2-EGFP연세포작위공재대조조.미전염세포위공백대조조.형광현미경하매2d관찰1차MCs적록색형광단백(Enhenced green fluorescent protein,EGFP)표체정황.비색법측정각조MCs적MnSOD활성.격광공취초현미경하관찰전염rAAV2-MnSOD-EGFP후MnSOD적표체,면역인적법(Western blot)정량분석MnSOD적표체.결과 (1) 각조MCs전염후,생장정상,공재대조조MCs전염rAAV2-EGFP후2천개시출현미약EGFP적표체.1주후지고봉;실험조전염rAAV2-MnSOD-EGFP후4 d출현EGFP적표체,10 d지고봉,차지속표체우세포배양적정개기간.EGFP적표체재형광현미경490 nm파장격발광하정황록색,미만우정개포질.(2)대격광공취초현미경급Western blot적검측결과진행분석,실험조교공재대조조화공백대조조적MCs중MnSOD적표체명현승고.차이유통계학의의.결론 rAAV2-MnSOD-EGFP능유효지전염체외배양적MCs병지속고표체MnSOD.
