CAJ | 학술논문

目的:为研制鼠疫亚单位疫苗,克隆、表达并纯化去除产生免疫抑制作用序列后的鼠疫耶尔森氏菌LcrV抗原(rV270).方法:依据已知的LcrV的核苷酸序列,避开其产生免疫抑制作用的区段设计引物,扩增rV270基因并克隆到pET24a载体中,在大肠杆菌BL21中表达His-rV270融合蛋白;表达产物先后经Co2+亲和层析和Sephacryl S-200 HR 凝胶柱纯化,并在纯化过程中应用凝血酶切除His标签;氢氧化铝佐剂吸附重组抗原后免疫BALB/c小鼠,初次免疫后第21天加强免疫1次,第5周使用104 CFU鼠疫菌141强毒株攻毒,测定其免疫保护作用.结果:rV270以可溶性方式表达;应用Co2+亲和层析柱和Sephacryl S-200 HR 凝胶柱结合凝血蛋白酶切除His标签的方法可得到不含标签的较高纯度的重组蛋白;攻毒实验中实验组小鼠全部存活,而对照组全部死亡.结论:获得了具有良好免疫保护作用的rV270蛋白.可用于鼠疫亚单位疫苗的研究.
목적:위연제서역아단위역묘,극륭、표체병순화거제산생면역억제작용서렬후적서역야이삼씨균LcrV항원(rV270).방법:의거이지적LcrV적핵감산서렬,피개기산생면역억제작용적구단설계인물,확증rV270기인병극륭도pET24a재체중,재대장간균BL21중표체His-rV270융합단백;표체산물선후경Co2+친화층석화Sephacryl S-200 HR 응효주순화,병재순화과정중응용응혈매절제His표첨;경양화려좌제흡부중조항원후면역BALB/c소서,초차면역후제21천가강면역1차,제5주사용104 CFU서역균141강독주공독,측정기면역보호작용.결과:rV270이가용성방식표체;응용Co2+친화층석주화Sephacryl S-200 HR 응효주결합응혈단백매절제His표첨적방법가득도불함표첨적교고순도적중조단백;공독실험중실험조소서전부존활,이대조조전부사망.결론:획득료구유량호면역보호작용적rV270단백.가용우서역아단위역묘적연구.