重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2010年
4期
579-581
,共3页
娄小丽%黄英%舒畅%陈洁%罗庆%王莉佳%吴雪郡
婁小麗%黃英%舒暢%陳潔%囉慶%王莉佳%吳雪郡
루소려%황영%서창%진길%라경%왕리가%오설군
血清淀粉样物质P%腺病毒%肺纤维化%分子克隆
血清澱粉樣物質P%腺病毒%肺纖維化%分子剋隆
혈청정분양물질P%선병독%폐섬유화%분자극륭
目的:制备能够表达大鼠血清淀粉样物质P(Serum amyloid P component,SAP)的重组腺病毒.方法:采用RT-PCR扩增的方法获取大鼠SAP,并将该基因采用定向克隆的方法克隆进入穿梭质粒pAdTraee-TO4中,进一步采用同源重组的方法将该质粒和腺病毒骨架质粒Adeasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,然后用脂质体介导的方法导入包装细胞HEK293中,产生表达目的基因的重组腺病毒,扩增病毒后用倍比稀释法测定其滴度.结果:通过PCR技术从重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒中扩增出700 bp左右插入片段,测序结果和基因库中的基因序列一致.扩增后的重组腺病毒滴度为2.8×108pfu/ml.结论:成功构建了携带SAP基因的重组腺病毒载体Adeasy-1-SAP.为探讨SAP对肺纤维化的作用及其机制打下基础.
目的:製備能夠錶達大鼠血清澱粉樣物質P(Serum amyloid P component,SAP)的重組腺病毒.方法:採用RT-PCR擴增的方法穫取大鼠SAP,併將該基因採用定嚮剋隆的方法剋隆進入穿梭質粒pAdTraee-TO4中,進一步採用同源重組的方法將該質粒和腺病毒骨架質粒Adeasy-1在大腸桿菌BJ5183中同源重組,然後用脂質體介導的方法導入包裝細胞HEK293中,產生錶達目的基因的重組腺病毒,擴增病毒後用倍比稀釋法測定其滴度.結果:通過PCR技術從重組穿梭質粒和重組腺病毒質粒中擴增齣700 bp左右插入片段,測序結果和基因庫中的基因序列一緻.擴增後的重組腺病毒滴度為2.8×108pfu/ml.結論:成功構建瞭攜帶SAP基因的重組腺病毒載體Adeasy-1-SAP.為探討SAP對肺纖維化的作用及其機製打下基礎.
목적:제비능구표체대서혈청정분양물질P(Serum amyloid P component,SAP)적중조선병독.방법:채용RT-PCR확증적방법획취대서SAP,병장해기인채용정향극륭적방법극륭진입천사질립pAdTraee-TO4중,진일보채용동원중조적방법장해질립화선병독골가질립Adeasy-1재대장간균BJ5183중동원중조,연후용지질체개도적방법도입포장세포HEK293중,산생표체목적기인적중조선병독,확증병독후용배비희석법측정기적도.결과:통과PCR기술종중조천사질립화중조선병독질립중확증출700 bp좌우삽입편단,측서결과화기인고중적기인서렬일치.확증후적중조선병독적도위2.8×108pfu/ml.결론:성공구건료휴대SAP기인적중조선병독재체Adeasy-1-SAP.위탐토SAP대폐섬유화적작용급기궤제타하기출.
