结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6 kDa蛋白原核载体的构建及在E.coli中的高效表达
결핵분지간균조기분비항원파6 kDa단백원핵재체적구건급재E.coli중적고효표체
Construction of prokaryotic recombinant plasmid and high expression in E.coli of Mycobacterium tuberculosis ESAT-6
  • 万方数据
    临床肺科杂志 림상폐과잡지
    JOUNAL OF CLINICAL PULMONARY MEDICINE
    2010年 6期 823-825 ,共3页

    李兵%刘威龙%张晶%张明霞%邓群益%李晓鹤%罗瑞玲%余卫业%陈心春%周伯平

    리병%류위룡%장정%장명하%산군익%리효학%라서령%여위업%진심춘%주백평

    结核分枝杆菌%早期分泌抗原靶6 kDa蛋白%原核表达 結覈分枝桿菌%早期分泌抗原靶6 kDa蛋白%原覈錶達
    결핵분지간균%조기분비항원파6 kDa단백%원핵표체
    目的 获得高效表达的结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6 kDa蛋白(ESAT-6).方法 利用PCR方法扩增出ESAT-6基因片段,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-21b(+),酶切分析和序列测定鉴定出ESAT-6基因的阳性重组子,将其转化入E.coli BL21(DE3),阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达;重组蛋白经Ni-NTA His*BindResins纯化.结果 成功扩增出ESAT-6基因片段,构建了重组表达质粒pET-ESAT-6,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为6 kD,经亲和纯化后的ESAT-6重组蛋白纯度高,且能被结核病人血清所识别.结论 利用pET原核表达系统成功的对结核分枝杆菌ESAT-6重组蛋白进行高效表达和纯化,重组蛋白具有良好的免疫活性.
    목적 획득고효표체적결핵분지간균조기분비항원파6 kDa단백(ESAT-6).방법 이용PCR방법확증출ESAT-6기인편단,장매절처리후적기인편단정향극륭도원핵표체재체pET-21b(+),매절분석화서렬측정감정출ESAT-6기인적양성중조자,장기전화입E.coli BL21(DE3),양성균주경IPTG유도,SDS-PAGE화면역인적분석파단백적표체;중조단백경Ni-NTA His*BindResins순화.결과 성공확증출ESAT-6기인편단,구건료중조표체질립pET-ESAT-6,SDS-PAGE현시표체산물분자량약위6 kD,경친화순화후적ESAT-6중조단백순도고,차능피결핵병인혈청소식별.결론 이용pET원핵표체계통성공적대결핵분지간균ESAT-6중조단백진행고효표체화순화,중조단백구유량호적면역활성.
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