食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2010年
4期
595-601
,共7页
金光泽%段作营%张莲芬%金坚%李华钟
金光澤%段作營%張蓮芬%金堅%李華鐘
금광택%단작영%장련분%금견%리화종
突变型人白介素-2%人血清白蛋白%毕赤酵母%融合蛋白
突變型人白介素-2%人血清白蛋白%畢赤酵母%融閤蛋白
돌변형인백개소-2%인혈청백단백%필적효모%융합단백
构建编码人血清白蛋白-人白介素-2 C125A的重组表达质粒,在Pichia pastoris GS115中表达,获得具有较高IL-2活性的融合蛋白.设计并合成符合P. pastoris密码子偏好,且含有C125A突变的IL-2编码基因IL-2m,通过酶切连接方法将其与人血清白蛋白(HSA)的编码基因连接为融合蛋白HSA-IL2m的编码基因.克隆到表达质粒pPIC9K中,电击转化P. pastoris GS115感受态细胞,获得重组P. pastoris GS115/pPHIm基因工程菌.摇瓶发酵获得分泌表达产物.结果: Western blot鉴定结果显示该融合蛋白与IL-2、HSA的抗体都能发生免疫反应.经脱盐、冻干制备的粗蛋白的IL-2生物学活性为1.51×106 IU/mg.结论:在P. pastoris GS115中成功表达了具有人白介素-2生物学活性的HSA-IL2m融合蛋白.
構建編碼人血清白蛋白-人白介素-2 C125A的重組錶達質粒,在Pichia pastoris GS115中錶達,穫得具有較高IL-2活性的融閤蛋白.設計併閤成符閤P. pastoris密碼子偏好,且含有C125A突變的IL-2編碼基因IL-2m,通過酶切連接方法將其與人血清白蛋白(HSA)的編碼基因連接為融閤蛋白HSA-IL2m的編碼基因.剋隆到錶達質粒pPIC9K中,電擊轉化P. pastoris GS115感受態細胞,穫得重組P. pastoris GS115/pPHIm基因工程菌.搖瓶髮酵穫得分泌錶達產物.結果: Western blot鑒定結果顯示該融閤蛋白與IL-2、HSA的抗體都能髮生免疫反應.經脫鹽、凍榦製備的粗蛋白的IL-2生物學活性為1.51×106 IU/mg.結論:在P. pastoris GS115中成功錶達瞭具有人白介素-2生物學活性的HSA-IL2m融閤蛋白.
구건편마인혈청백단백-인백개소-2 C125A적중조표체질립,재Pichia pastoris GS115중표체,획득구유교고IL-2활성적융합단백.설계병합성부합P. pastoris밀마자편호,차함유C125A돌변적IL-2편마기인IL-2m,통과매절련접방법장기여인혈청백단백(HSA)적편마기인련접위융합단백HSA-IL2m적편마기인.극륭도표체질립pPIC9K중,전격전화P. pastoris GS115감수태세포,획득중조P. pastoris GS115/pPHIm기인공정균.요병발효획득분비표체산물.결과: Western blot감정결과현시해융합단백여IL-2、HSA적항체도능발생면역반응.경탈염、동간제비적조단백적IL-2생물학활성위1.51×106 IU/mg.결론:재P. pastoris GS115중성공표체료구유인백개소-2생물학활성적HSA-IL2m융합단백.
