广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
8期
1-5
,共5页
高秋芳%郭安平%孔华%邓伟科%贺立卡
高鞦芳%郭安平%孔華%鄧偉科%賀立卡
고추방%곽안평%공화%산위과%하립잡
果胶裂解酶%木聚糖酶%表达%毕赤酵母
果膠裂解酶%木聚糖酶%錶達%畢赤酵母
과효렬해매%목취당매%표체%필적효모
运用RT-PCR技术,从绿色木霉(AS3.3711) mRNA中扩增出木聚糖酶基因xyn2,并与质粒pPIC9K相连,构建了表达载体pPIC9K-xyn2,转化毕赤酵母GS115,并且将pPIC9K-xyn2和pPIC9K-PelC(果胶裂解酶)同时转化毕赤酵母GS115,通过组氨酸营养缺陷型筛选,G418高拷贝菌株筛选,以及摇瓶诱导表达筛选,分别得到一株高表达术聚糖酶毕赤酵母菌株X5和一株同时高表达木聚糖酶和果胶裂解酶毕赤酵母菌株PX6.同时,将一株高表达果胶裂解酶毕赤酵母菌株P2保存.重组酶酶学性质分析表明,P2和PX6分泌果胶裂解酶,X5和PX6分泌木聚精酶最适温度均为50℃;P2分泌果胶裂解酶最适pH5.4,最大酶活为14.2U/mL;X5分泌木聚糖酶最适pH6.0,最大酶活为5.8 U/mL:PX6分泌果胶裂解酶最适pH5.4,最大酶活为12.6 U/mL,分泌木聚糖酶最适pH6.0,最大酶活为4.2 U/mL.
運用RT-PCR技術,從綠色木黴(AS3.3711) mRNA中擴增齣木聚糖酶基因xyn2,併與質粒pPIC9K相連,構建瞭錶達載體pPIC9K-xyn2,轉化畢赤酵母GS115,併且將pPIC9K-xyn2和pPIC9K-PelC(果膠裂解酶)同時轉化畢赤酵母GS115,通過組氨痠營養缺陷型篩選,G418高拷貝菌株篩選,以及搖瓶誘導錶達篩選,分彆得到一株高錶達術聚糖酶畢赤酵母菌株X5和一株同時高錶達木聚糖酶和果膠裂解酶畢赤酵母菌株PX6.同時,將一株高錶達果膠裂解酶畢赤酵母菌株P2保存.重組酶酶學性質分析錶明,P2和PX6分泌果膠裂解酶,X5和PX6分泌木聚精酶最適溫度均為50℃;P2分泌果膠裂解酶最適pH5.4,最大酶活為14.2U/mL;X5分泌木聚糖酶最適pH6.0,最大酶活為5.8 U/mL:PX6分泌果膠裂解酶最適pH5.4,最大酶活為12.6 U/mL,分泌木聚糖酶最適pH6.0,最大酶活為4.2 U/mL.
운용RT-PCR기술,종록색목매(AS3.3711) mRNA중확증출목취당매기인xyn2,병여질립pPIC9K상련,구건료표체재체pPIC9K-xyn2,전화필적효모GS115,병차장pPIC9K-xyn2화pPIC9K-PelC(과효렬해매)동시전화필적효모GS115,통과조안산영양결함형사선,G418고고패균주사선,이급요병유도표체사선,분별득도일주고표체술취당매필적효모균주X5화일주동시고표체목취당매화과효렬해매필적효모균주PX6.동시,장일주고표체과효렬해매필적효모균주P2보존.중조매매학성질분석표명,P2화PX6분비과효렬해매,X5화PX6분비목취정매최괄온도균위50℃;P2분비과효렬해매최괄pH5.4,최대매활위14.2U/mL;X5분비목취당매최괄pH6.0,최대매활위5.8 U/mL:PX6분비과효렬해매최괄pH5.4,최대매활위12.6 U/mL,분비목취당매최괄pH6.0,최대매활위4.2 U/mL.
