CAJ | 학술논문

本研究旨在制备抗鸭β-防御素9(AvBD9)蛋白的单克隆抗体.首先用pGEX-6p-1载体表达的鸭AvBD9蛋白做抗原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠(Mus musculus),免疫3次,每次间隔15 d,融合前3 d加强免疫1次.然后将鸭AvBD9基因亚克隆到原核表达载体pET-32a的EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切位点上,构建重组表达质粒pET-32a-duckAvBD9,将重组质粒转化至大肠杆菌(Escheriohia coli)BL21(JM83-)株,经IPTG诱导表达、镍柱纯化后做检测原.用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot相结合的方法进行筛选及鉴定,经3次亚克隆后得到1株单抗,命名为1F11.结果表明:重组pET-32a-duckAvBD9蛋白大小为26kD,与预期大小一致,并能被抗pGEX-duck AvBD9阳性血清识别.单抗1F11在pGEX-6p-1空载体蛋白、pGEX-duck AvBD9蛋白、pGEX-duck AvBD10蛋白、pGEX-chicken AvBD10蛋白中能够特异性识别pGEX-duckAvBD9蛋白.其亚类鉴定重链为IgG1,轻链为κ链.本研究获得了1株鸭AvBD9蛋白的单克隆抗体,单抗1F11的特异性良好,可用于对鸭AvBD9蛋白的生物学功能及活性作进一步研究.
본연구지재제비항압β-방어소9(AvBD9)단백적단극륭항체.수선용pGEX-6p-1재체표체적압AvBD9단백주항원면역6～8주령자성BALB/c소서(Mus musculus),면역3차,매차간격15 d,융합전3 d가강면역1차.연후장압AvBD9기인아극륭도원핵표체재체pET-32a적EcoR Ⅰ화Sal Ⅰ쌍매절위점상,구건중조표체질립pET-32a-duckAvBD9,장중조질립전화지대장간균(Escheriohia coli)BL21(JM83-)주,경IPTG유도표체、얼주순화후주검측원.용간접매련면역흡부실험(ELISA)화Western blot상결합적방법진행사선급감정,경3차아극륭후득도1주단항,명명위1F11.결과표명:중조pET-32a-duckAvBD9단백대소위26kD,여예기대소일치,병능피항pGEX-duck AvBD9양성혈청식별.단항1F11재pGEX-6p-1공재체단백、pGEX-duck AvBD9단백、pGEX-duck AvBD10단백、pGEX-chicken AvBD10단백중능구특이성식별pGEX-duckAvBD9단백.기아류감정중련위IgG1,경련위κ련.본연구획득료1주압AvBD9단백적단극륭항체,단항1F11적특이성량호,가용우대압AvBD9단백적생물학공능급활성작진일보연구.