CAJ | 학술논문

为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)多靶基因PCR检测方法,本实验将KHV接种鲤鱼鳍条细胞,收获病变细胞悬液,提取DNA,根据GenBank中登录的KHV基因序列及出入境检验检疫行业标准推荐的基因(ORF7),设计合成3对特异性引物,针对胸苷激酶基因(TK)、聚合酶基因(Sph)和ORF7基因进行PCR检测.通过优化后的反应体系进行特异性、敏感性试验和样品检测.结果表明:3对引物能够分别特异性扩增出409bp、292 bp和484bp片段;敏感性试验表明对TK基因检测的敏感性高于Sph和ORF7基因,其最低检测量为1.9×106copies/μL;采用优化的3个PCR方法对8个有临床症状的样品进行检测,其中3份样品的3个基因PCR扩增结果均为阳性.因此,本研究选取的3个基因均可用于KHV的检测及确证实验.
위건립금리포진병독(KHV)다파기인PCR검측방법,본실험장KHV접충리어기조세포,수획병변세포현액,제취DNA,근거GenBank중등록적KHV기인서렬급출입경검험검역행업표준추천적기인(ORF7),설계합성3대특이성인물,침대흉감격매기인(TK)、취합매기인(Sph)화ORF7기인진행PCR검측.통과우화후적반응체계진행특이성、민감성시험화양품검측.결과표명:3대인물능구분별특이성확증출409bp、292 bp화484bp편단;민감성시험표명대TK기인검측적민감성고우Sph화ORF7기인,기최저검측량위1.9×106copies/μL;채용우화적3개PCR방법대8개유림상증상적양품진행검측,기중3빈양품적3개기인PCR확증결과균위양성.인차,본연구선취적3개기인균가용우KHV적검측급학증실험.