CAJ | 학술논문

△FosB作为FosB的一种截短型,具有广泛的生物学功能,在脂、钙沉积和药物成瘾等方面有重要作用.本研究采用RNA干扰技术,通过制备重组干扰腺病毒对山羊(Caprar hircus)△FosB基因进行沉默,进一步研究山羊△FosB基因在脂、钙沉积方面的相关功能及作用机制.实验采用BLOCK-iT slaRNA腺病毒干扰系统,将预先设计好的寡聚shRNA-492/572经退火复性后克隆入穿梭质粒pENTR/CMV-GFP/U6中.经干扰效率检测后,选择pENTR/CMV-GFP/U6-572与病毒骨架质粒pAD/PL-DEST进行同源重组,获得重组干扰腺病毒载体pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-572,并转染HEK-293细胞,经包装、扩增后即可产生干扰腺病毒AD-△FosB-572,TCID50法测定其滴度为1.58x109 PFU/mL.用AD-△FosB-572感染山羊的乳腺上皮细胞(MOI=200),经Western blot及实时定量PCR检测证明在病毒感染24、48和72 h后,山羊乳腺上皮细胞中△FosBmRNA表达量分别下调了45%,73%和81%,其蛋白表达水平也明显下调,干扰效果明显,可用于后续的基因功能研究.
△FosB작위FosB적일충절단형,구유엄범적생물학공능,재지、개침적화약물성은등방면유중요작용.본연구채용RNA간우기술,통과제비중조간우선병독대산양(Caprar hircus)△FosB기인진행침묵,진일보연구산양△FosB기인재지、개침적방면적상관공능급작용궤제.실험채용BLOCK-iT slaRNA선병독간우계통,장예선설계호적과취shRNA-492/572경퇴화복성후극륭입천사질립pENTR/CMV-GFP/U6중.경간우효솔검측후,선택pENTR/CMV-GFP/U6-572여병독골가질립pAD/PL-DEST진행동원중조,획득중조간우선병독재체pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-572,병전염HEK-293세포,경포장、확증후즉가산생간우선병독AD-△FosB-572,TCID50법측정기적도위1.58x109 PFU/mL.용AD-△FosB-572감염산양적유선상피세포(MOI=200),경Western blot급실시정량PCR검측증명재병독감염24、48화72 h후,산양유선상피세포중△FosBmRNA표체량분별하조료45%,73%화81%,기단백표체수평야명현하조,간우효과명현,가용우후속적기인공능연구.