中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2011年
12期
1119-1122,1128
,共5页
苗平%钱柳%赵蓉%余奇文%张继英%陈雪华%陆梅生%张冬青
苗平%錢柳%趙蓉%餘奇文%張繼英%陳雪華%陸梅生%張鼕青
묘평%전류%조용%여기문%장계영%진설화%륙매생%장동청
IL-6%gp130%单克隆抗体%特异性%亲和力
IL-6%gp130%單剋隆抗體%特異性%親和力
IL-6%gp130%단극륭항체%특이성%친화력
目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能.方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株.大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应.结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖.结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段.
目的:製備小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)單剋隆抗體,併分析其生物學特性及初步的免疫學功能.方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,經三次免疫穫得高效價的ELISA結果後,取小鼠的脾細胞和SP2/0骨髓瘤細胞進行融閤,經多次亞剋隆篩選得到穩定分泌抗gp130單剋隆抗體的雜交瘤細胞株.大量擴增雜交瘤細胞,收集細胞上清,隨即過親閤層析柱進行純化,對經純化的抗人gp130單剋隆抗體進行亞型鑒定,用Western blot及間接ELISA、biacore方法分析抗人gp130單剋隆抗體的純度、特異性及親和力,用FACS術檢測抗人gp130單剋隆抗體與膜錶麵富含IL-6受體的U266細胞繫的結閤率,同時建立IL-6誘導的U266細胞增殖繫統,用以檢測和分析抗人gp130單剋隆抗體的抑製和阻斷效應.結果:本研究穫得瞭多株能夠穩定分泌抗人gp130單剋隆抗體的細胞株,取其中一株(14C4)進行分析,錶明其亞型屬于IgG2b,輕鏈為κ鏈,經Western blot及間接ELISA證明此株抗體有較高的純度及特異性,biacore結果顯示14C4與抗原結閤的親和力為2.62E-10,FACS結果證實能與U266細胞錶麵的gp130特異性結閤,併且呈劑量依賴性,細胞增殖實驗說明14C4在一定程度上可抑製IL-6誘導的U266細胞的增殖.結論:初步成功製備瞭抗gp130單剋隆抗體,併且具備較好的生物學特性,為研究人IL-6gp130在抗感染、炎癥以及腫瘤和自身免疫病學中的診斷和治療中的意義提供瞭有效的工具和手段.
목적:제비소서항인IL-6Rβ(gp130)단극륭항체,병분석기생물학특성급초보적면역학공능.방법:용gp130항원면역BALB/c소서,경삼차면역획득고효개적ELISA결과후,취소서적비세포화SP2/0골수류세포진행융합,경다차아극륭사선득도은정분비항gp130단극륭항체적잡교류세포주.대량확증잡교류세포,수집세포상청,수즉과친합층석주진행순화,대경순화적항인gp130단극륭항체진행아형감정,용Western blot급간접ELISA、biacore방법분석항인gp130단극륭항체적순도、특이성급친화력,용FACS술검측항인gp130단극륭항체여막표면부함IL-6수체적U266세포계적결합솔,동시건립IL-6유도적U266세포증식계통,용이검측화분석항인gp130단극륭항체적억제화조단효응.결과:본연구획득료다주능구은정분비항인gp130단극륭항체적세포주,취기중일주(14C4)진행분석,표명기아형속우IgG2b,경련위κ련,경Western blot급간접ELISA증명차주항체유교고적순도급특이성,biacore결과현시14C4여항원결합적친화력위2.62E-10,FACS결과증실능여U266세포표면적gp130특이성결합,병차정제량의뢰성,세포증식실험설명14C4재일정정도상가억제IL-6유도적U266세포적증식.결론:초보성공제비료항gp130단극륭항체,병차구비교호적생물학특성,위연구인IL-6gp130재항감염、염증이급종류화자신면역병학중적진단화치료중적의의제공료유효적공구화수단.
