CAJ | 학술논문

目的研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)对体外培养的神经干细胞(NSC)增殖和分化的影响,为研究先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常的机制奠定理论基础.方法体外分离、培养和鉴定BABL/c胎鼠NSC,用含LacZ报告基因的重组小鼠巨细胞病毒RM461感染NSC,X-gal染色监测感染过程,透射电镜观察超微结构改变,PCR检测受染细胞及培养上清中病毒DNA及观察培养上清接种到小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的细胞病变效应,了解RM461对NSC的感染情况.通过绘制生长曲线、流式细胞术检测分化细胞比率,研究RM461对NSC增殖和分化的影响.结果RM461感染NSC 48 h后细胞出现肿胀、体积增大、神经球边缘的细胞发生脱落和死亡,细胞形态的改变随感染复数(MOI)的增加而更加明显;X-gal染色,24h受染细胞即可出现阳性改变,48 h达高峰;RM461感染72 h时,受染细胞及培养上清中病毒DNA呈阳性,培养上清接种到MEF后可出现明显的细胞病变效应,电镜下受染细胞胞浆中存在病毒颗粒,细胞器肿胀明显;RM461可明显抑制NSC的增殖和分化,当MOI为1时,分化培养2 d,感染组胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇酶(NSE)阳性细胞的比例分别为(37.4±1.6)%和(8.9±0.8)%,远较未感染组[分别为(50.3±1.8)%和(23.4±1.3)%]低(P＜0.01),且GFAP和NSE阳性细胞比率随MOI的增加降低更加明显.结论RM461可感染体外培养的NSC,并能形成产毒性感染;RM461可明显抑制NSC细胞的增殖和分化并导致干细胞死亡,这可能与先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常有关.
목적연구소서거세포병독(MCMV)대체외배양적신경간세포(NSC)증식화분화적영향,위연구선천성거세포병독감염치뇌발육이상적궤제전정이론기출.방법체외분리、배양화감정BABL/c태서NSC,용함LacZ보고기인적중조소서거세포병독RM461감염NSC,X-gal염색감측감염과정,투사전경관찰초미결구개변,PCR검측수염세포급배양상청중병독DNA급관찰배양상청접충도소서배태성섬유세포(MEF)적세포병변효응,료해RM461대NSC적감염정황.통과회제생장곡선、류식세포술검측분화세포비솔,연구RM461대NSC증식화분화적영향.결과RM461감염NSC 48 h후세포출현종창、체적증대、신경구변연적세포발생탈락화사망,세포형태적개변수감염복수(MOI)적증가이경가명현;X-gal염색,24h수염세포즉가출현양성개변,48 h체고봉;RM461감염72 h시,수염세포급배양상청중병독DNA정양성,배양상청접충도MEF후가출현명현적세포병변효응,전경하수염세포포장중존재병독과립,세포기종창명현;RM461가명현억제NSC적증식화분화,당MOI위1시,분화배양2 d,감염조효질원섬유산성단백(GFAP)화신경원특이성희순매(NSE)양성세포적비례분별위(37.4±1.6)%화(8.9±0.8)%,원교미감염조[분별위(50.3±1.8)%화(23.4±1.3)%]저(P＜0.01),차GFAP화NSE양성세포비솔수MOI적증가강저경가명현.결론RM461가감염체외배양적NSC,병능형성산독성감염;RM461가명현억제NSC세포적증식화분화병도치간세포사망,저가능여선천성거세포병독감염치뇌발육이상유관.