中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2006年
2期
169-173
,共5页
周玉峰%方峰%甄宏%付劲蓉%易文龙%李革%董永绥
週玉峰%方峰%甄宏%付勁蓉%易文龍%李革%董永綏
주옥봉%방봉%견굉%부경용%역문룡%리혁%동영수
巨细胞病毒%神经干细胞%脑发育异常%先天性感染
巨細胞病毒%神經榦細胞%腦髮育異常%先天性感染
거세포병독%신경간세포%뇌발육이상%선천성감염
目的研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)对体外培养的神经干细胞(NSC)增殖和分化的影响,为研究先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常的机制奠定理论基础.方法体外分离、培养和鉴定BABL/c胎鼠NSC,用含LacZ报告基因的重组小鼠巨细胞病毒RM461感染NSC,X-gal染色监测感染过程,透射电镜观察超微结构改变,PCR检测受染细胞及培养上清中病毒DNA及观察培养上清接种到小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的细胞病变效应,了解RM461对NSC的感染情况.通过绘制生长曲线、流式细胞术检测分化细胞比率,研究RM461对NSC增殖和分化的影响.结果RM461感染NSC 48 h后细胞出现肿胀、体积增大、神经球边缘的细胞发生脱落和死亡,细胞形态的改变随感染复数(MOI)的增加而更加明显;X-gal染色,24h受染细胞即可出现阳性改变,48 h达高峰;RM461感染72 h时,受染细胞及培养上清中病毒DNA呈阳性,培养上清接种到MEF后可出现明显的细胞病变效应,电镜下受染细胞胞浆中存在病毒颗粒,细胞器肿胀明显;RM461可明显抑制NSC的增殖和分化,当MOI为1时,分化培养2 d,感染组胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇酶(NSE)阳性细胞的比例分别为(37.4±1.6)%和(8.9±0.8)%,远较未感染组[分别为(50.3±1.8)%和(23.4±1.3)%]低(P<0.01),且GFAP和NSE阳性细胞比率随MOI的增加降低更加明显.结论RM461可感染体外培养的NSC,并能形成产毒性感染;RM461可明显抑制NSC细胞的增殖和分化并导致干细胞死亡,这可能与先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常有关.
目的研究小鼠巨細胞病毒(MCMV)對體外培養的神經榦細胞(NSC)增殖和分化的影響,為研究先天性巨細胞病毒感染緻腦髮育異常的機製奠定理論基礎.方法體外分離、培養和鑒定BABL/c胎鼠NSC,用含LacZ報告基因的重組小鼠巨細胞病毒RM461感染NSC,X-gal染色鑑測感染過程,透射電鏡觀察超微結構改變,PCR檢測受染細胞及培養上清中病毒DNA及觀察培養上清接種到小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)的細胞病變效應,瞭解RM461對NSC的感染情況.通過繪製生長麯線、流式細胞術檢測分化細胞比率,研究RM461對NSC增殖和分化的影響.結果RM461感染NSC 48 h後細胞齣現腫脹、體積增大、神經毬邊緣的細胞髮生脫落和死亡,細胞形態的改變隨感染複數(MOI)的增加而更加明顯;X-gal染色,24h受染細胞即可齣現暘性改變,48 h達高峰;RM461感染72 h時,受染細胞及培養上清中病毒DNA呈暘性,培養上清接種到MEF後可齣現明顯的細胞病變效應,電鏡下受染細胞胞漿中存在病毒顆粒,細胞器腫脹明顯;RM461可明顯抑製NSC的增殖和分化,噹MOI為1時,分化培養2 d,感染組膠質原纖維痠性蛋白(GFAP)和神經元特異性烯醇酶(NSE)暘性細胞的比例分彆為(37.4±1.6)%和(8.9±0.8)%,遠較未感染組[分彆為(50.3±1.8)%和(23.4±1.3)%]低(P<0.01),且GFAP和NSE暘性細胞比率隨MOI的增加降低更加明顯.結論RM461可感染體外培養的NSC,併能形成產毒性感染;RM461可明顯抑製NSC細胞的增殖和分化併導緻榦細胞死亡,這可能與先天性巨細胞病毒感染緻腦髮育異常有關.
목적연구소서거세포병독(MCMV)대체외배양적신경간세포(NSC)증식화분화적영향,위연구선천성거세포병독감염치뇌발육이상적궤제전정이론기출.방법체외분리、배양화감정BABL/c태서NSC,용함LacZ보고기인적중조소서거세포병독RM461감염NSC,X-gal염색감측감염과정,투사전경관찰초미결구개변,PCR검측수염세포급배양상청중병독DNA급관찰배양상청접충도소서배태성섬유세포(MEF)적세포병변효응,료해RM461대NSC적감염정황.통과회제생장곡선、류식세포술검측분화세포비솔,연구RM461대NSC증식화분화적영향.결과RM461감염NSC 48 h후세포출현종창、체적증대、신경구변연적세포발생탈락화사망,세포형태적개변수감염복수(MOI)적증가이경가명현;X-gal염색,24h수염세포즉가출현양성개변,48 h체고봉;RM461감염72 h시,수염세포급배양상청중병독DNA정양성,배양상청접충도MEF후가출현명현적세포병변효응,전경하수염세포포장중존재병독과립,세포기종창명현;RM461가명현억제NSC적증식화분화,당MOI위1시,분화배양2 d,감염조효질원섬유산성단백(GFAP)화신경원특이성희순매(NSE)양성세포적비례분별위(37.4±1.6)%화(8.9±0.8)%,원교미감염조[분별위(50.3±1.8)%화(23.4±1.3)%]저(P<0.01),차GFAP화NSE양성세포비솔수MOI적증가강저경가명현.결론RM461가감염체외배양적NSC,병능형성산독성감염;RM461가명현억제NSC세포적증식화분화병도치간세포사망,저가능여선천성거세포병독감염치뇌발육이상유관.