免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2005年
4期
320-322,326
,共4页
肌钙蛋白Ⅰ%密码子偏爱性%克隆%表达
肌鈣蛋白Ⅰ%密碼子偏愛性%剋隆%錶達
기개단백Ⅰ%밀마자편애성%극륭%표체
目的人工设计合成完整的人心肌肌钙蛋白Ⅰ(hcTnI)基因,克隆并在大肠杆菌中获得高效表达.方法根据大肠杆菌遗传密码的偏爱性,人工设计合成hcTnI基因,测序正确后通过DNA重组技术将其插入温控型表达载体pBV220,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α,构建cTnI基因的非融合表达菌hcTnI-pBV220/DH5α,热激后诱导非融合蛋白的表达,用单克隆抗体检测特异性hcTnI蛋白表达.结果序列分析表明克隆载体中的cTnI人工基因与设计相符,双酶切电泳结果证明表达载体构建成功,经SDS-PAGE证实重组蛋白的相对分子质量(Mr)约24000,凝胶密度扫描约占菌体总蛋白的25%,能与cTnI单克隆抗体特异性结合.结论成功获得cTnI人工基因,构建了cTnI基因原核表达载体并获得了高效表达,为制备高特异性的抗体及临床检测应用奠定了基础.
目的人工設計閤成完整的人心肌肌鈣蛋白Ⅰ(hcTnI)基因,剋隆併在大腸桿菌中穫得高效錶達.方法根據大腸桿菌遺傳密碼的偏愛性,人工設計閤成hcTnI基因,測序正確後通過DNA重組技術將其插入溫控型錶達載體pBV220,轉化大腸桿菌(E.coli)DH5α,構建cTnI基因的非融閤錶達菌hcTnI-pBV220/DH5α,熱激後誘導非融閤蛋白的錶達,用單剋隆抗體檢測特異性hcTnI蛋白錶達.結果序列分析錶明剋隆載體中的cTnI人工基因與設計相符,雙酶切電泳結果證明錶達載體構建成功,經SDS-PAGE證實重組蛋白的相對分子質量(Mr)約24000,凝膠密度掃描約佔菌體總蛋白的25%,能與cTnI單剋隆抗體特異性結閤.結論成功穫得cTnI人工基因,構建瞭cTnI基因原覈錶達載體併穫得瞭高效錶達,為製備高特異性的抗體及臨床檢測應用奠定瞭基礎.
목적인공설계합성완정적인심기기개단백Ⅰ(hcTnI)기인,극륭병재대장간균중획득고효표체.방법근거대장간균유전밀마적편애성,인공설계합성hcTnI기인,측서정학후통과DNA중조기술장기삽입온공형표체재체pBV220,전화대장간균(E.coli)DH5α,구건cTnI기인적비융합표체균hcTnI-pBV220/DH5α,열격후유도비융합단백적표체,용단극륭항체검측특이성hcTnI단백표체.결과서렬분석표명극륭재체중적cTnI인공기인여설계상부,쌍매절전영결과증명표체재체구건성공,경SDS-PAGE증실중조단백적상대분자질량(Mr)약24000,응효밀도소묘약점균체총단백적25%,능여cTnI단극륭항체특이성결합.결론성공획득cTnI인공기인,구건료cTnI기인원핵표체재체병획득료고효표체,위제비고특이성적항체급림상검측응용전정료기출.
