中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2011年
10期
861-865,881
,共6页
王越%杨再峰%马安%施晓华%陈璋辉%刘晓龙%干小仙
王越%楊再峰%馬安%施曉華%陳璋輝%劉曉龍%榦小仙
왕월%양재봉%마안%시효화%진장휘%류효룡%간소선
日本血吸虫%虫卵可溶性抗原%免疫蛋白质组学
日本血吸蟲%蟲卵可溶性抗原%免疫蛋白質組學
일본혈흡충%충란가용성항원%면역단백질조학
目的 虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA)是目前日本血吸虫病免疫诊断中最常用的抗原.本研究联合应用双向凝胶电泳(2-DE)、Western blot和MALDI-TOF质谱等技术,鉴定SEA中诊断抗原蛋白质.方法 SEA经2-DE分离蛋白质后进行银染,或应用日本血吸虫感染兔血清Western blot筛选抗原蛋白点,用MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定每一抗原蛋白质分子.结果 虫卵可溶性蛋白分子经2-DE分离后转印PVDF膜上,与感染兔血清孵育出现29个特异性阳性反应点,与健康兔血清出现3个非特异的阳性反应点;29个特异性抗阳性反应点中,从银染2-DE胶图上找到21个匹配的抗原蛋白质点;MALDI-TOF/TOF质谱鉴定和NCBI数据库检索,13个点(61.9%)获得匹配蛋白质,4个点(19.0%)获得匹配EST,4个点(19.0%)未能从数据库中找到相匹配的信息.重组表达筛选出的SjCHGC06040和SjP40两个抗原蛋白质,Western blot结果显示reSjCHGC06040、reSjP40均能与感染兔血清抗体发生特异性反应,具有潜在的应用价值.结论 2-DE、MALDI-TOF质谱联合Western blot的免疫蛋白质组学研究方法,用于筛选、鉴定SEA中诊断抗原蛋白质,是切实可行的;但该方法存在一定的局限性,有待进一步改进.
目的 蟲卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA)是目前日本血吸蟲病免疫診斷中最常用的抗原.本研究聯閤應用雙嚮凝膠電泳(2-DE)、Western blot和MALDI-TOF質譜等技術,鑒定SEA中診斷抗原蛋白質.方法 SEA經2-DE分離蛋白質後進行銀染,或應用日本血吸蟲感染兔血清Western blot篩選抗原蛋白點,用MALDI-TOF/TOF串聯質譜鑒定每一抗原蛋白質分子.結果 蟲卵可溶性蛋白分子經2-DE分離後轉印PVDF膜上,與感染兔血清孵育齣現29箇特異性暘性反應點,與健康兔血清齣現3箇非特異的暘性反應點;29箇特異性抗暘性反應點中,從銀染2-DE膠圖上找到21箇匹配的抗原蛋白質點;MALDI-TOF/TOF質譜鑒定和NCBI數據庫檢索,13箇點(61.9%)穫得匹配蛋白質,4箇點(19.0%)穫得匹配EST,4箇點(19.0%)未能從數據庫中找到相匹配的信息.重組錶達篩選齣的SjCHGC06040和SjP40兩箇抗原蛋白質,Western blot結果顯示reSjCHGC06040、reSjP40均能與感染兔血清抗體髮生特異性反應,具有潛在的應用價值.結論 2-DE、MALDI-TOF質譜聯閤Western blot的免疫蛋白質組學研究方法,用于篩選、鑒定SEA中診斷抗原蛋白質,是切實可行的;但該方法存在一定的跼限性,有待進一步改進.
목적 충란가용성항원(soluble egg antigen,SEA)시목전일본혈흡충병면역진단중최상용적항원.본연구연합응용쌍향응효전영(2-DE)、Western blot화MALDI-TOF질보등기술,감정SEA중진단항원단백질.방법 SEA경2-DE분리단백질후진행은염,혹응용일본혈흡충감염토혈청Western blot사선항원단백점,용MALDI-TOF/TOF천련질보감정매일항원단백질분자.결과 충란가용성단백분자경2-DE분리후전인PVDF막상,여감염토혈청부육출현29개특이성양성반응점,여건강토혈청출현3개비특이적양성반응점;29개특이성항양성반응점중,종은염2-DE효도상조도21개필배적항원단백질점;MALDI-TOF/TOF질보감정화NCBI수거고검색,13개점(61.9%)획득필배단백질,4개점(19.0%)획득필배EST,4개점(19.0%)미능종수거고중조도상필배적신식.중조표체사선출적SjCHGC06040화SjP40량개항원단백질,Western blot결과현시reSjCHGC06040、reSjP40균능여감염토혈청항체발생특이성반응,구유잠재적응용개치.결론 2-DE、MALDI-TOF질보연합Western blot적면역단백질조학연구방법,용우사선、감정SEA중진단항원단백질,시절실가행적;단해방법존재일정적국한성,유대진일보개진.