宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2012年
8期
757-759,778
,共4页
Sox2%荧光素酶报告基因分析%CD133启动子
Sox2%熒光素酶報告基因分析%CD133啟動子
Sox2%형광소매보고기인분석%CD133계동자
目的 构建人Sox2基因的真核表达载体并研究其对CD133基因启动子的调控.方法 采用PCR方法,从人乳腺癌细胞MCF-7的cDNA中扩增出Sox2基因全长,将其定向克隆至真核表达载体pcDNA3.0中,构建重组质粒pcDNA-Sox2,经限制性内切酶、PCR鉴定及测序正确后,分别将空载pcDNA3.0与重组质粒pcDNA-Sox2转染人神经胶质瘤U251细胞系,通过RT-PCR和Western blot方法,验证Sox2 mRNA和蛋白的表达.同样采用PCR方法,以人全基因组DNA为模板扩增CD133基因的启动子P1-3片段,并将此片段克隆到PGL3-basic荧光素酶报告基因质粒中,经限制性内切酶、PCR鉴定及测序正确后,将空载PGL3-basic与PGL3-CD133-p1-3转染人神经胶质瘤U251细胞系,用双荧光素酶检测方法分析Sox2对CD133基因转录水平上的调控.结果 扩增出954bp的Sox2基因,并检测到重组质粒Sox2 mRNA和蛋白的表达.扩增出2440bp 的CD133-p1-3启动子片段,且Sox2可上调CD133基因启动子的表达.结论 成功构建了人Sox2基因真核表达载体,以及CD133启动子荧光素酶报告质粒,并检测到Sox2与CD133之间存在一定的调控关系,为进一步研究人Sox2对CD133的作用奠定了基础.
目的 構建人Sox2基因的真覈錶達載體併研究其對CD133基因啟動子的調控.方法 採用PCR方法,從人乳腺癌細胞MCF-7的cDNA中擴增齣Sox2基因全長,將其定嚮剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.0中,構建重組質粒pcDNA-Sox2,經限製性內切酶、PCR鑒定及測序正確後,分彆將空載pcDNA3.0與重組質粒pcDNA-Sox2轉染人神經膠質瘤U251細胞繫,通過RT-PCR和Western blot方法,驗證Sox2 mRNA和蛋白的錶達.同樣採用PCR方法,以人全基因組DNA為模闆擴增CD133基因的啟動子P1-3片段,併將此片段剋隆到PGL3-basic熒光素酶報告基因質粒中,經限製性內切酶、PCR鑒定及測序正確後,將空載PGL3-basic與PGL3-CD133-p1-3轉染人神經膠質瘤U251細胞繫,用雙熒光素酶檢測方法分析Sox2對CD133基因轉錄水平上的調控.結果 擴增齣954bp的Sox2基因,併檢測到重組質粒Sox2 mRNA和蛋白的錶達.擴增齣2440bp 的CD133-p1-3啟動子片段,且Sox2可上調CD133基因啟動子的錶達.結論 成功構建瞭人Sox2基因真覈錶達載體,以及CD133啟動子熒光素酶報告質粒,併檢測到Sox2與CD133之間存在一定的調控關繫,為進一步研究人Sox2對CD133的作用奠定瞭基礎.
목적 구건인Sox2기인적진핵표체재체병연구기대CD133기인계동자적조공.방법 채용PCR방법,종인유선암세포MCF-7적cDNA중확증출Sox2기인전장,장기정향극륭지진핵표체재체pcDNA3.0중,구건중조질립pcDNA-Sox2,경한제성내절매、PCR감정급측서정학후,분별장공재pcDNA3.0여중조질립pcDNA-Sox2전염인신경효질류U251세포계,통과RT-PCR화Western blot방법,험증Sox2 mRNA화단백적표체.동양채용PCR방법,이인전기인조DNA위모판확증CD133기인적계동자P1-3편단,병장차편단극륭도PGL3-basic형광소매보고기인질립중,경한제성내절매、PCR감정급측서정학후,장공재PGL3-basic여PGL3-CD133-p1-3전염인신경효질류U251세포계,용쌍형광소매검측방법분석Sox2대CD133기인전록수평상적조공.결과 확증출954bp적Sox2기인,병검측도중조질립Sox2 mRNA화단백적표체.확증출2440bp 적CD133-p1-3계동자편단,차Sox2가상조CD133기인계동자적표체.결론 성공구건료인Sox2기인진핵표체재체,이급CD133계동자형광소매보고질립,병검측도Sox2여CD133지간존재일정적조공관계,위진일보연구인Sox2대CD133적작용전정료기출.
