中华医学杂志
中華醫學雜誌
중화의학잡지
National Medical Journal of China
2004年
10期
843-848
,共6页
孙立峰%郑树%史影%方晓明%葛维挺%丁克峰
孫立峰%鄭樹%史影%方曉明%葛維挺%丁剋峰
손립봉%정수%사영%방효명%갈유정%정극봉
基因表达调控%结肠直肠肿瘤%肌动蛋白类
基因錶達調控%結腸直腸腫瘤%肌動蛋白類
기인표체조공%결장직장종류%기동단백류
目的探讨SNC19/ST14表达对大肠癌细胞生物学行为的影响.方法定向克隆法构建SNC19/ST14基因全长阅读开放框(ORF)的真核表达载体;脂质体转染RKO结肠癌细胞株,筛选阳性克隆;用实时荧光定量聚合酶链反应、Western 印迹和免疫组织化学法检测SNC19/ST14蛋白的表达;MTT法测定细胞的群体倍增时间(TD);流式细胞仪测定细胞周期;罗丹明-鬼笔环肽标记细胞的骨架蛋白F-肌动蛋白,用激光共聚焦显微镜观察F-肌动蛋白的变化;并测定细胞对细胞外基质(ECM)的黏附能力.结果成功构建了真核细胞表达载体pSecTag2a-SNC19/ST14(ORF),并筛选到稳定表达SNC19/ST14蛋白的RKO-SNC19/ST14细胞;观察到SNC19/ST14使细胞骨架蛋白F-肌动蛋白的排列发生改变,并使细胞对细胞外基质的黏附能力下降,但SNC19/ST14的表达对细胞增殖、凋亡和细胞周期影响不明显.结论成功地使SNC19/ST14基因在真核细胞中稳定表达,并发现SNC19/ST14可能与细胞骨架蛋白F-肌动蛋白的聚集和极化有关,并可能通过此种作用影响到细胞对细胞外基质的黏附能力,但对细胞的增殖、凋亡及细胞周期影响不大.
目的探討SNC19/ST14錶達對大腸癌細胞生物學行為的影響.方法定嚮剋隆法構建SNC19/ST14基因全長閱讀開放框(ORF)的真覈錶達載體;脂質體轉染RKO結腸癌細胞株,篩選暘性剋隆;用實時熒光定量聚閤酶鏈反應、Western 印跡和免疫組織化學法檢測SNC19/ST14蛋白的錶達;MTT法測定細胞的群體倍增時間(TD);流式細胞儀測定細胞週期;囉丹明-鬼筆環肽標記細胞的骨架蛋白F-肌動蛋白,用激光共聚焦顯微鏡觀察F-肌動蛋白的變化;併測定細胞對細胞外基質(ECM)的黏附能力.結果成功構建瞭真覈細胞錶達載體pSecTag2a-SNC19/ST14(ORF),併篩選到穩定錶達SNC19/ST14蛋白的RKO-SNC19/ST14細胞;觀察到SNC19/ST14使細胞骨架蛋白F-肌動蛋白的排列髮生改變,併使細胞對細胞外基質的黏附能力下降,但SNC19/ST14的錶達對細胞增殖、凋亡和細胞週期影響不明顯.結論成功地使SNC19/ST14基因在真覈細胞中穩定錶達,併髮現SNC19/ST14可能與細胞骨架蛋白F-肌動蛋白的聚集和極化有關,併可能通過此種作用影響到細胞對細胞外基質的黏附能力,但對細胞的增殖、凋亡及細胞週期影響不大.
목적탐토SNC19/ST14표체대대장암세포생물학행위적영향.방법정향극륭법구건SNC19/ST14기인전장열독개방광(ORF)적진핵표체재체;지질체전염RKO결장암세포주,사선양성극륭;용실시형광정량취합매련반응、Western 인적화면역조직화학법검측SNC19/ST14단백적표체;MTT법측정세포적군체배증시간(TD);류식세포의측정세포주기;라단명-귀필배태표기세포적골가단백F-기동단백,용격광공취초현미경관찰F-기동단백적변화;병측정세포대세포외기질(ECM)적점부능력.결과성공구건료진핵세포표체재체pSecTag2a-SNC19/ST14(ORF),병사선도은정표체SNC19/ST14단백적RKO-SNC19/ST14세포;관찰도SNC19/ST14사세포골가단백F-기동단백적배렬발생개변,병사세포대세포외기질적점부능력하강,단SNC19/ST14적표체대세포증식、조망화세포주기영향불명현.결론성공지사SNC19/ST14기인재진핵세포중은정표체,병발현SNC19/ST14가능여세포골가단백F-기동단백적취집화겁화유관,병가능통과차충작용영향도세포대세포외기질적점부능력,단대세포적증식、조망급세포주기영향불대.
