中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2004年
3期
255-257
,共3页
丁忠庆%刘胜旺%孔宪刚%宋铭忻
丁忠慶%劉勝旺%孔憲剛%宋銘忻
정충경%류성왕%공헌강%송명흔
鸡IFN-γ%融合蛋白%表达%抗体制备
鷄IFN-γ%融閤蛋白%錶達%抗體製備
계IFN-γ%융합단백%표체%항체제비
将克隆得到的鸡IFN-γ基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pPROExTMHT的Pst I和Kpn I位点上,构建了重组表达质粒pPROEXTMHT-IFN-γ,经序列分析鉴定,确证目的基因克隆入载体的预期位点.将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,于37 C不同时间诱导培养,SDS-PAGE电泳表明,该基因在大肠杆菌中发生高水平表达,表达的鸡IFN-γ融合蛋白相对分子质量约为22 000.重组蛋白占菌体总蛋白的33%.经Western blot鉴定,该重组蛋白质具有生物学活性.包涵体被6 mol/L盐酸胍裂解后,通过镍离子亲和树脂进行了纯化.用所获得的重组鸡IFN-γ融合蛋白及其纯化产物经3次肌肉注射于新西兰白兔,制备了兔抗鸡IFN-γ多克隆抗体.琼脂扩散结果表明,多克隆抗体可与纯化的鸡IFN-γ重组蛋白发生特异性反应.
將剋隆得到的鷄IFN-γ基因亞剋隆到大腸桿菌原覈錶達載體pPROExTMHT的Pst I和Kpn I位點上,構建瞭重組錶達質粒pPROEXTMHT-IFN-γ,經序列分析鑒定,確證目的基因剋隆入載體的預期位點.將重組質粒轉化大腸桿菌DH5α,于37 C不同時間誘導培養,SDS-PAGE電泳錶明,該基因在大腸桿菌中髮生高水平錶達,錶達的鷄IFN-γ融閤蛋白相對分子質量約為22 000.重組蛋白佔菌體總蛋白的33%.經Western blot鑒定,該重組蛋白質具有生物學活性.包涵體被6 mol/L鹽痠胍裂解後,通過鎳離子親和樹脂進行瞭純化.用所穫得的重組鷄IFN-γ融閤蛋白及其純化產物經3次肌肉註射于新西蘭白兔,製備瞭兔抗鷄IFN-γ多剋隆抗體.瓊脂擴散結果錶明,多剋隆抗體可與純化的鷄IFN-γ重組蛋白髮生特異性反應.
장극륭득도적계IFN-γ기인아극륭도대장간균원핵표체재체pPROExTMHT적Pst I화Kpn I위점상,구건료중조표체질립pPROEXTMHT-IFN-γ,경서렬분석감정,학증목적기인극륭입재체적예기위점.장중조질립전화대장간균DH5α,우37 C불동시간유도배양,SDS-PAGE전영표명,해기인재대장간균중발생고수평표체,표체적계IFN-γ융합단백상대분자질량약위22 000.중조단백점균체총단백적33%.경Western blot감정,해중조단백질구유생물학활성.포함체피6 mol/L염산고렬해후,통과얼리자친화수지진행료순화.용소획득적중조계IFN-γ융합단백급기순화산물경3차기육주사우신서란백토,제비료토항계IFN-γ다극륭항체.경지확산결과표명,다극륭항체가여순화적계IFN-γ중조단백발생특이성반응.
