中国新药杂志
中國新藥雜誌
중국신약잡지
CHINESE NEW DRUGS JOURNAL
2007年
7期
527-531
,共5页
真核细胞翻译启动因子5A(eIF5A)%pcDNA3.1%克隆表达载体%真核表达载体
真覈細胞翻譯啟動因子5A(eIF5A)%pcDNA3.1%剋隆錶達載體%真覈錶達載體
진핵세포번역계동인자5A(eIF5A)%pcDNA3.1%극륭표체재체%진핵표체재체
目的:摸索真核细胞翻译启动因子5A(eIF5A)编码基因的合成、pcDNA3.1/eIF5A真核表达载体的构建及其在真核细胞CCRF-CEM中的表达.方法:用PCR合成eIF5A基因,将基因分别接在克隆载体pMD 18-T的EcoR V多克隆位点上和真核表达载体pcDNA3.1的Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ的多克隆位点之间,构建eIF5A基因的克隆载体和真核表达载体,分别在大肠杆菌E.coli DH5α中转化并提取质粒,将真核表达载体pcDNA3.1/eIF5A的质粒提取后,用脂质体包合并转染真核细胞CCRF-CEM,用流式细胞仪对eIF5A的表达水平进行检测.结果:eIF5A在CCRF-CEM细胞中的表达水平为107.03,eIF5A在转染细胞CCRF-CEM/trans中的表达水平为114.27,表达升高.结论:本实验构建了pcDNA3.1/eIF5A真核表达载体,发现其在CCRF-CEM细胞中高表达.本实验结果将有助于探讨肿瘤治疗过程中的新靶标.
目的:摸索真覈細胞翻譯啟動因子5A(eIF5A)編碼基因的閤成、pcDNA3.1/eIF5A真覈錶達載體的構建及其在真覈細胞CCRF-CEM中的錶達.方法:用PCR閤成eIF5A基因,將基因分彆接在剋隆載體pMD 18-T的EcoR V多剋隆位點上和真覈錶達載體pcDNA3.1的Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ的多剋隆位點之間,構建eIF5A基因的剋隆載體和真覈錶達載體,分彆在大腸桿菌E.coli DH5α中轉化併提取質粒,將真覈錶達載體pcDNA3.1/eIF5A的質粒提取後,用脂質體包閤併轉染真覈細胞CCRF-CEM,用流式細胞儀對eIF5A的錶達水平進行檢測.結果:eIF5A在CCRF-CEM細胞中的錶達水平為107.03,eIF5A在轉染細胞CCRF-CEM/trans中的錶達水平為114.27,錶達升高.結論:本實驗構建瞭pcDNA3.1/eIF5A真覈錶達載體,髮現其在CCRF-CEM細胞中高錶達.本實驗結果將有助于探討腫瘤治療過程中的新靶標.
목적:모색진핵세포번역계동인자5A(eIF5A)편마기인적합성、pcDNA3.1/eIF5A진핵표체재체적구건급기재진핵세포CCRF-CEM중적표체.방법:용PCR합성eIF5A기인,장기인분별접재극륭재체pMD 18-T적EcoR V다극륭위점상화진핵표체재체pcDNA3.1적Hind Ⅲ화EcoR Ⅰ적다극륭위점지간,구건eIF5A기인적극륭재체화진핵표체재체,분별재대장간균E.coli DH5α중전화병제취질립,장진핵표체재체pcDNA3.1/eIF5A적질립제취후,용지질체포합병전염진핵세포CCRF-CEM,용류식세포의대eIF5A적표체수평진행검측.결과:eIF5A재CCRF-CEM세포중적표체수평위107.03,eIF5A재전염세포CCRF-CEM/trans중적표체수평위114.27,표체승고.결론:본실험구건료pcDNA3.1/eIF5A진핵표체재체,발현기재CCRF-CEM세포중고표체.본실험결과장유조우탐토종류치료과정중적신파표.
