医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2009年
1期
9-12
,共4页
方建飞%李晓冬%何津岩%葛林%杨洁
方建飛%李曉鼕%何津巖%葛林%楊潔
방건비%리효동%하진암%갈림%양길
增强型绿色荧光蛋白%STAT6%重组质粒
增彊型綠色熒光蛋白%STAT6%重組質粒
증강형록색형광단백%STAT6%중조질립
目的 构建以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)为报告基因的重组质粒pEGFP-C1-STAT6,观察其在HeLa细胞中的表达.方法 以重组质粒pCLNEO-STAT6为模板,PCR法扩增出目的 基因,将扩增片段双酶切后连接到质粒pEGFP-C1上,构建重组质粒pEGFP-C1-STAT6,脂质体法转染HeLa细胞,Western 印迹检测融合蛋白的表达,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的定位和分布.结果 成功构建质粒pEGFP-C1-STAT6,并在HeLa细胞中实现表达;Western 印迹检测到融合蛋白EGFP-STAT6;在荧光显微镜下观察到绿色的融合蛋白表达和定位.结论 重组质粒pEGFP-C1-STAT6构建成功,可用于标记STAT6蛋白,为进一步研究STAT6在信号转导中的作用机制奠定基础.
目的 構建以增彊型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)為報告基因的重組質粒pEGFP-C1-STAT6,觀察其在HeLa細胞中的錶達.方法 以重組質粒pCLNEO-STAT6為模闆,PCR法擴增齣目的 基因,將擴增片段雙酶切後連接到質粒pEGFP-C1上,構建重組質粒pEGFP-C1-STAT6,脂質體法轉染HeLa細胞,Western 印跡檢測融閤蛋白的錶達,併在熒光顯微鏡下觀察融閤蛋白的定位和分佈.結果 成功構建質粒pEGFP-C1-STAT6,併在HeLa細胞中實現錶達;Western 印跡檢測到融閤蛋白EGFP-STAT6;在熒光顯微鏡下觀察到綠色的融閤蛋白錶達和定位.結論 重組質粒pEGFP-C1-STAT6構建成功,可用于標記STAT6蛋白,為進一步研究STAT6在信號轉導中的作用機製奠定基礎.
목적 구건이증강형록색형광단백(enhanced green fluorescence protein,EGFP)위보고기인적중조질립pEGFP-C1-STAT6,관찰기재HeLa세포중적표체.방법 이중조질립pCLNEO-STAT6위모판,PCR법확증출목적 기인,장확증편단쌍매절후련접도질립pEGFP-C1상,구건중조질립pEGFP-C1-STAT6,지질체법전염HeLa세포,Western 인적검측융합단백적표체,병재형광현미경하관찰융합단백적정위화분포.결과 성공구건질립pEGFP-C1-STAT6,병재HeLa세포중실현표체;Western 인적검측도융합단백EGFP-STAT6;재형광현미경하관찰도록색적융합단백표체화정위.결론 중조질립pEGFP-C1-STAT6구건성공,가용우표기STAT6단백,위진일보연구STAT6재신호전도중적작용궤제전정기출.
