生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2009年
1期
69-71,102
,共4页
阙友雄%江克清%许莉萍%郭莺%林剑伟%陈如凯
闕友雄%江剋清%許莉萍%郭鶯%林劍偉%陳如凱
궐우웅%강극청%허리평%곽앵%림검위%진여개
甘蔗花叶病毒%外壳蛋白%原核表达%纯化%多克隆抗体%组织印迹
甘蔗花葉病毒%外殼蛋白%原覈錶達%純化%多剋隆抗體%組織印跡
감자화협병독%외각단백%원핵표체%순화%다극륭항체%조직인적
目的:制备可用于甘蔗花叶病毒(ScMV)E株系(ScMV-E)检测用多克隆抗体.方法:将ScMV-E外壳蛋白(CP)基因连接到pET29a(+)上,经PCR检测、酶切及测序鉴定获得重组质粒pET29a-CP,在大肠杆菌B121(DE3)中诱导表达重组ScMV-E外壳蛋白;采用His Trap Kit纯化目的蛋白,作为抗原免疫新西兰大白兔,制备特异性抗体;通过间接ELISA、Westem blot和组织印迹法检测所制备抗体的特异性.结果:SDS-PAGE分析表明.重组融合蛋白含6个组氨酸标记,相对分子质量约43 000;Westem blot检测显示所获得的抗体特异性良好,间接ELISA法测得血清的效价为1:81 920;甘蔗叶片的组织印迹检测结果显示杂交效果良好.结论:制备的多克隆抗体可直接用于ScMV-E检测,并有望用于制备ScMV-E检测试剂盒.
目的:製備可用于甘蔗花葉病毒(ScMV)E株繫(ScMV-E)檢測用多剋隆抗體.方法:將ScMV-E外殼蛋白(CP)基因連接到pET29a(+)上,經PCR檢測、酶切及測序鑒定穫得重組質粒pET29a-CP,在大腸桿菌B121(DE3)中誘導錶達重組ScMV-E外殼蛋白;採用His Trap Kit純化目的蛋白,作為抗原免疫新西蘭大白兔,製備特異性抗體;通過間接ELISA、Westem blot和組織印跡法檢測所製備抗體的特異性.結果:SDS-PAGE分析錶明.重組融閤蛋白含6箇組氨痠標記,相對分子質量約43 000;Westem blot檢測顯示所穫得的抗體特異性良好,間接ELISA法測得血清的效價為1:81 920;甘蔗葉片的組織印跡檢測結果顯示雜交效果良好.結論:製備的多剋隆抗體可直接用于ScMV-E檢測,併有望用于製備ScMV-E檢測試劑盒.
목적:제비가용우감자화협병독(ScMV)E주계(ScMV-E)검측용다극륭항체.방법:장ScMV-E외각단백(CP)기인련접도pET29a(+)상,경PCR검측、매절급측서감정획득중조질립pET29a-CP,재대장간균B121(DE3)중유도표체중조ScMV-E외각단백;채용His Trap Kit순화목적단백,작위항원면역신서란대백토,제비특이성항체;통과간접ELISA、Westem blot화조직인적법검측소제비항체적특이성.결과:SDS-PAGE분석표명.중조융합단백함6개조안산표기,상대분자질량약43 000;Westem blot검측현시소획득적항체특이성량호,간접ELISA법측득혈청적효개위1:81 920;감자협편적조직인적검측결과현시잡교효과량호.결론:제비적다극륭항체가직접용우ScMV-E검측,병유망용우제비ScMV-E검측시제합.
