癌症
癌癥
암증
CHINESE JOURNAL OF CANCER
2009年
3期
225-231
,共7页
刘凯%张洁%任婧婧%王修杰%杨洪亮%林苹
劉凱%張潔%任婧婧%王脩傑%楊洪亮%林蘋
류개%장길%임청청%왕수걸%양홍량%림평
ATP1B1%胃肿瘤%腺癌细胞%RNA干扰%细胞增殖%细胞迁移
ATP1B1%胃腫瘤%腺癌細胞%RNA榦擾%細胞增殖%細胞遷移
ATP1B1%위종류%선암세포%RNA간우%세포증식%세포천이
背景与目的:Na+-K+ATP酶B1亚基基因ATP1B1在高分化的肿瘤细胞中表达高,低分化的表达低,并且ATP1B1的表达与细胞紧密连接和上皮细胞的极性有关.因此.我们构建了特异性干扰ATP1B1 mRNA的短发夹RNA.以探讨干扰ATP1B1对人胃腺癌细胞株SGC-7901增殖和迁移能力的影响.方法:构建特异性干扰ATP1B1 mRNA的短发夹RNA质粒表达载体,转染SGC-7901细胞,G418筛选阳性克隆细胞,RT-PCR和real-timePCR法检测ATP1B1 mRNA的表达.通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,以及克隆形成实验、Transwell小室迁移实验等方法观察ATP1B1对细胞增殖和迁移的影响.结果:瞬间转染后24 h,sh150,sh295,sh562.sh765干扰位点及shNC对SGC-7901细胞ATP1B1mRNA的抑制率分别为(60.87±4.38)%,(44.93±2.24)%,(49.28±2.02)%,(52.17±2.60)%,(3±0.15)%,4个位点对ATBiBl tuRNA均有抑制效应.150位点对ATBlBl基因的抑制效应强于其它3个位点,用作后续实验.G418筛选后.获得了具有稳定干扰ATP1B1 mRNA效应的细胞株shATP1B1-7901,RT-PCR初步分析,sh150位点对ATP1B1-7901细胞的ATP1B1 mRNA的抑制率为(85.72±5.22)%.与阴性对照组的(3.3±0.22)%相比,P<0.05;Real-time PCR检测结果显示,shATP1B1-7901细胞中ATP1β1 mRNA的抑制率为(87.53±3.23)%,高于阴性对照组shNC-7901的(4.17±0.33)%,P<0.05.MTT法细胞增殖实验中,第三天后,shATP1B1-7901细胞的增殖率大于阴性对照组和空白对照组,经统计学分析,P<0.05,差异有统计学意义.流式细胞术结果显示,shATP1B1-7901的S期和G<,2>/M期细胞比例增加,大于阴性对照组和空白对照组,P<0.05,差异有统计学意义,阴性对照组和空白对照组的周期分布差异无统计学意义.shATP1B1-7901稳定株细胞的克隆形成率为(68.50±2.65)%,大于阴性对照组的(50.00±2.53)%及空白对照组的(52.50±2.1 1)%,P<0.05.shATP1B1-7901稳定株细胞的迁移率(2.80±0.02)%,大于阴性对照组的(1.15±0.05)%和空白对照组的(1.25±0.02)%.P<0.05.结论:ATP1B1基因沉默后,人胃腺癌细胞SGC-7901增殖能力和迁移能力增强.
揹景與目的:Na+-K+ATP酶B1亞基基因ATP1B1在高分化的腫瘤細胞中錶達高,低分化的錶達低,併且ATP1B1的錶達與細胞緊密連接和上皮細胞的極性有關.因此.我們構建瞭特異性榦擾ATP1B1 mRNA的短髮夾RNA.以探討榦擾ATP1B1對人胃腺癌細胞株SGC-7901增殖和遷移能力的影響.方法:構建特異性榦擾ATP1B1 mRNA的短髮夾RNA質粒錶達載體,轉染SGC-7901細胞,G418篩選暘性剋隆細胞,RT-PCR和real-timePCR法檢測ATP1B1 mRNA的錶達.通過MTT法檢測細胞增殖,流式細胞術檢測細胞週期,以及剋隆形成實驗、Transwell小室遷移實驗等方法觀察ATP1B1對細胞增殖和遷移的影響.結果:瞬間轉染後24 h,sh150,sh295,sh562.sh765榦擾位點及shNC對SGC-7901細胞ATP1B1mRNA的抑製率分彆為(60.87±4.38)%,(44.93±2.24)%,(49.28±2.02)%,(52.17±2.60)%,(3±0.15)%,4箇位點對ATBiBl tuRNA均有抑製效應.150位點對ATBlBl基因的抑製效應彊于其它3箇位點,用作後續實驗.G418篩選後.穫得瞭具有穩定榦擾ATP1B1 mRNA效應的細胞株shATP1B1-7901,RT-PCR初步分析,sh150位點對ATP1B1-7901細胞的ATP1B1 mRNA的抑製率為(85.72±5.22)%.與陰性對照組的(3.3±0.22)%相比,P<0.05;Real-time PCR檢測結果顯示,shATP1B1-7901細胞中ATP1β1 mRNA的抑製率為(87.53±3.23)%,高于陰性對照組shNC-7901的(4.17±0.33)%,P<0.05.MTT法細胞增殖實驗中,第三天後,shATP1B1-7901細胞的增殖率大于陰性對照組和空白對照組,經統計學分析,P<0.05,差異有統計學意義.流式細胞術結果顯示,shATP1B1-7901的S期和G<,2>/M期細胞比例增加,大于陰性對照組和空白對照組,P<0.05,差異有統計學意義,陰性對照組和空白對照組的週期分佈差異無統計學意義.shATP1B1-7901穩定株細胞的剋隆形成率為(68.50±2.65)%,大于陰性對照組的(50.00±2.53)%及空白對照組的(52.50±2.1 1)%,P<0.05.shATP1B1-7901穩定株細胞的遷移率(2.80±0.02)%,大于陰性對照組的(1.15±0.05)%和空白對照組的(1.25±0.02)%.P<0.05.結論:ATP1B1基因沉默後,人胃腺癌細胞SGC-7901增殖能力和遷移能力增彊.
배경여목적:Na+-K+ATP매B1아기기인ATP1B1재고분화적종류세포중표체고,저분화적표체저,병차ATP1B1적표체여세포긴밀련접화상피세포적겁성유관.인차.아문구건료특이성간우ATP1B1 mRNA적단발협RNA.이탐토간우ATP1B1대인위선암세포주SGC-7901증식화천이능력적영향.방법:구건특이성간우ATP1B1 mRNA적단발협RNA질립표체재체,전염SGC-7901세포,G418사선양성극륭세포,RT-PCR화real-timePCR법검측ATP1B1 mRNA적표체.통과MTT법검측세포증식,류식세포술검측세포주기,이급극륭형성실험、Transwell소실천이실험등방법관찰ATP1B1대세포증식화천이적영향.결과:순간전염후24 h,sh150,sh295,sh562.sh765간우위점급shNC대SGC-7901세포ATP1B1mRNA적억제솔분별위(60.87±4.38)%,(44.93±2.24)%,(49.28±2.02)%,(52.17±2.60)%,(3±0.15)%,4개위점대ATBiBl tuRNA균유억제효응.150위점대ATBlBl기인적억제효응강우기타3개위점,용작후속실험.G418사선후.획득료구유은정간우ATP1B1 mRNA효응적세포주shATP1B1-7901,RT-PCR초보분석,sh150위점대ATP1B1-7901세포적ATP1B1 mRNA적억제솔위(85.72±5.22)%.여음성대조조적(3.3±0.22)%상비,P<0.05;Real-time PCR검측결과현시,shATP1B1-7901세포중ATP1β1 mRNA적억제솔위(87.53±3.23)%,고우음성대조조shNC-7901적(4.17±0.33)%,P<0.05.MTT법세포증식실험중,제삼천후,shATP1B1-7901세포적증식솔대우음성대조조화공백대조조,경통계학분석,P<0.05,차이유통계학의의.류식세포술결과현시,shATP1B1-7901적S기화G<,2>/M기세포비례증가,대우음성대조조화공백대조조,P<0.05,차이유통계학의의,음성대조조화공백대조조적주기분포차이무통계학의의.shATP1B1-7901은정주세포적극륭형성솔위(68.50±2.65)%,대우음성대조조적(50.00±2.53)%급공백대조조적(52.50±2.1 1)%,P<0.05.shATP1B1-7901은정주세포적천이솔(2.80±0.02)%,대우음성대조조적(1.15±0.05)%화공백대조조적(1.25±0.02)%.P<0.05.결론:ATP1B1기인침묵후,인위선암세포SGC-7901증식능력화천이능력증강.
