信阳师范学院学报(自然科学版)
信暘師範學院學報(自然科學版)
신양사범학원학보(자연과학판)
JOURNAL OF XINYANG TEACHERS COLLEGE(NATURAL SCIENCE EDITION)
2009年
1期
71-73
,共3页
陈华友%谭小力%张志燕%褚仲梅
陳華友%譚小力%張誌燕%褚仲梅
진화우%담소력%장지연%저중매
小分子热休克蛋白%Pyrococcus furosus%分子伴侣
小分子熱休剋蛋白%Pyrococcus furosus%分子伴侶
소분자열휴극단백%Pyrococcus furosus%분자반려
用PCR扩增嗜高温菌Pyrococctu furiosus的小分子热休克蛋白基因后,克隆于质粒pT7473中.该小分子热休克蛋白Pfu-sHSP含有较多的稀有密码子,在大肠杆菌BL21(DE),几乎无表达,而在带有大肠杆菌稀有密码子AGA(arg)AGG(arg),AUA(ile)和CUA(leu)的BL21-Codonplus(DE)3-RIL中能大量表迭.大量表达Pfu-sHSP蛋白的细胞用超声波破碎后,离心沉淀用85℃水浴20 min,再离心,上清液再以Q Sepha-rose Fast Flow阴离子交换和S-200凝胶过滤层析进一步纯化,可以得到90%以上的蛋白.
用PCR擴增嗜高溫菌Pyrococctu furiosus的小分子熱休剋蛋白基因後,剋隆于質粒pT7473中.該小分子熱休剋蛋白Pfu-sHSP含有較多的稀有密碼子,在大腸桿菌BL21(DE),幾乎無錶達,而在帶有大腸桿菌稀有密碼子AGA(arg)AGG(arg),AUA(ile)和CUA(leu)的BL21-Codonplus(DE)3-RIL中能大量錶迭.大量錶達Pfu-sHSP蛋白的細胞用超聲波破碎後,離心沉澱用85℃水浴20 min,再離心,上清液再以Q Sepha-rose Fast Flow陰離子交換和S-200凝膠過濾層析進一步純化,可以得到90%以上的蛋白.
용PCR확증기고온균Pyrococctu furiosus적소분자열휴극단백기인후,극륭우질립pT7473중.해소분자열휴극단백Pfu-sHSP함유교다적희유밀마자,재대장간균BL21(DE),궤호무표체,이재대유대장간균희유밀마자AGA(arg)AGG(arg),AUA(ile)화CUA(leu)적BL21-Codonplus(DE)3-RIL중능대량표질.대량표체Pfu-sHSP단백적세포용초성파파쇄후,리심침정용85℃수욕20 min,재리심,상청액재이Q Sepha-rose Fast Flow음리자교환화S-200응효과려층석진일보순화,가이득도90%이상적단백.
