畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
3期
343-348
,共6页
贾汝敏%吴慧英%刘铀%张丽
賈汝敏%吳慧英%劉鈾%張麗
가여민%오혜영%류유%장려
狮头鹅%催乳素%克隆%基因表达PRL蛋白
獅頭鵝%催乳素%剋隆%基因錶達PRL蛋白
사두아%최유소%극륭%기인표체PRL단백
为了进一步研究PRL对狮头鹅繁殖性能的生理调节机制,采用RT-PCR方法从狮头鹅脑垂体组织扩增获得PRL基因的cDNA序列,克隆至pMD18-T载体获得重组质粒pMD18-PRI,并进行序列测定和分析.将测序正确的cDNA序列定向克隆到pET32a(+),构建表达载体pET32a-PRI,并转化至BL21(DE3)大肠杆菌表达目的蛋白,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测和Western Blot分析.狮头鹅PRL基因编码区含有600个核苷酸,编码199个氨基酸(GenBank No.GQ856665),与其它禽类PRL具有高度保守性;狮头鹅PRL蛋白二级结构由多个α螺旋和β转角及无规卷曲构成,推测N端70～76、95～102、150～155和207～213区段为其抗原表位的优势区.SDS-PAGE检测表明狮头鹅PRL基因在大肠杆菌中获得了高效表达,可溶性表达产物约占全菌总蛋白的53.6%,融合蛋白分子量约41 ku,并用镍柱亲和层析法分离纯化融合蛋白.Western Blot分析证实了所获的融合蛋白具有较强抗原性.式验结果为进一步研究PRL基因的生物功能及其对狮头鹅就巢、产蛋等生产性状的影响奠定了基础.
為瞭進一步研究PRL對獅頭鵝繁殖性能的生理調節機製,採用RT-PCR方法從獅頭鵝腦垂體組織擴增穫得PRL基因的cDNA序列,剋隆至pMD18-T載體穫得重組質粒pMD18-PRI,併進行序列測定和分析.將測序正確的cDNA序列定嚮剋隆到pET32a(+),構建錶達載體pET32a-PRI,併轉化至BL21(DE3)大腸桿菌錶達目的蛋白,經IPTG誘導後進行SDS-PAGE檢測和Western Blot分析.獅頭鵝PRL基因編碼區含有600箇覈苷痠,編碼199箇氨基痠(GenBank No.GQ856665),與其它禽類PRL具有高度保守性;獅頭鵝PRL蛋白二級結構由多箇α螺鏇和β轉角及無規捲麯構成,推測N耑70～76、95～102、150～155和207～213區段為其抗原錶位的優勢區.SDS-PAGE檢測錶明獅頭鵝PRL基因在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達,可溶性錶達產物約佔全菌總蛋白的53.6%,融閤蛋白分子量約41 ku,併用鎳柱親和層析法分離純化融閤蛋白.Western Blot分析證實瞭所穫的融閤蛋白具有較彊抗原性.式驗結果為進一步研究PRL基因的生物功能及其對獅頭鵝就巢、產蛋等生產性狀的影響奠定瞭基礎.
위료진일보연구PRL대사두아번식성능적생리조절궤제,채용RT-PCR방법종사두아뇌수체조직확증획득PRL기인적cDNA서렬,극륭지pMD18-T재체획득중조질립pMD18-PRI,병진행서렬측정화분석.장측서정학적cDNA서렬정향극륭도pET32a(+),구건표체재체pET32a-PRI,병전화지BL21(DE3)대장간균표체목적단백,경IPTG유도후진행SDS-PAGE검측화Western Blot분석.사두아PRL기인편마구함유600개핵감산,편마199개안기산(GenBank No.GQ856665),여기타금류PRL구유고도보수성;사두아PRL단백이급결구유다개α라선화β전각급무규권곡구성,추측N단70～76、95～102、150～155화207～213구단위기항원표위적우세구.SDS-PAGE검측표명사두아PRL기인재대장간균중획득료고효표체,가용성표체산물약점전균총단백적53.6%,융합단백분자량약41 ku,병용얼주친화층석법분리순화융합단백.Western Blot분석증실료소획적융합단백구유교강항원성.식험결과위진일보연구PRL기인적생물공능급기대사두아취소、산단등생산성상적영향전정료기출.
